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dzwd

金虫 (小有名气)

[求助] 长片段DNA如何连接载体

4900bp长度 DNA 片段,我用的是TAKARA,PMD19-T载体进行连接,连接数小时,但是在筛选蓝白菌斑的时候,菌落白斑过少,不知道是什么原因,并且菌落PCR后无条带,总是连接不上。。希望能得到解答,谢谢!!
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 有道理! 2011-08-12 18:17:52
dzwd(金币+1): 2011-08-15 07:35:17
大片段连接就是很难的,但是一直坚持做几天总会成功的。另外菌检的时候尽量扩增片段在2000bp一下,实在扩不出来就挑几个摇菌提质粒酶切验证。
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
8楼2011-08-12 10:55:40
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

dzwd(金币+1): 2011-08-13 22:48:56
楼主的DNA片段浓度太小吧!
jiayoubashaonian
2楼2011-08-12 10:48:20
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good!7K多,不错嘛! 2011-08-12 18:17:36
我们曾今做过7.3k的连接,将目的片段浓度调节的特别大,最后加了100ul感受态,板子长的时间长些!
jiayoubashaonian
3楼2011-08-12 10:50:20
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dzwd

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-12 10:50:20:
我们曾今做过7.3k的连接,将目的片段浓度调节的特别大,最后加了100ul感受态,板子长的时间长些!

你们在连接载体的时候,用了多少ul的目的片段呢
4楼2011-08-12 10:51:54
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