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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 长片段DNA如何连接载体
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dzwd

金虫 (小有名气)

[求助] 长片段DNA如何连接载体

4900bp长度 DNA 片段，我用的是TAKARA,PMD19-T载体进行连接，连接数小时，但是在筛选蓝白菌斑的时候，菌落白斑过少，不知道是什么原因，并且菌落PCR后无条带，总是连接不上。。希望能得到解答，谢谢！！
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1楼 2011-08-12 10:45:43
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 有道理！ 2011-08-12 18:17:52
dzwd(金币+1): 2011-08-15 07:35:17
大片段连接就是很难的，但是一直坚持做几天总会成功的。另外菌检的时候尽量扩增片段在2000bp一下，实在扩不出来就挑几个摇菌提质粒酶切验证。
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
8楼2011-08-12 10:55:40
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

dzwd(金币+1): 2011-08-13 22:48:56
楼主的DNA片段浓度太小吧！
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jiayoubashaonian
2楼2011-08-12 10:48:20
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good！7K多，不错嘛！ 2011-08-12 18:17:36
我们曾今做过7.3k的连接，将目的片段浓度调节的特别大，最后加了100ul感受态，板子长的时间长些！
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jiayoubashaonian
3楼2011-08-12 10:50:20
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dzwd

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-12 10:50:20:
我们曾今做过7.3k的连接，将目的片段浓度调节的特别大，最后加了100ul感受态，板子长的时间长些！

你们在连接载体的时候，用了多少ul的目的片段呢
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4楼2011-08-12 10:51:54
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