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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)


[交流] 关于DH5a和BL21的表达问题??

问一下为什么后者是表达载体而前者是扩增载体,是基因组的表达不同还是添加了不同的基因在基因组?
还有就是用前者表达蛋白可以吗?  即便是小量的。
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楼主可以查一下蛋白表达的原理,包括不同诱导条件的几种》
2楼2011-08-12 09:01:26
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w2boluo

金虫 (小有名气)


★ ★ ★
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loveskyzhou(金币+1): 谢谢 2011-08-12 10:54:45
西瓜(金币+2): 看文献很用心哦 2011-08-12 18:11:16
BL21(DE3)基因组中多个T7RNA聚合酶.
前者插入的外源片段往往也有本底表达,确实见过有文献用dh5alpha表达外源蛋白的,还是nature。。
3楼2011-08-12 09:46:46
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西瓜(金币+1): 鼓励下 2011-08-12 18:10:43
两者都是大肠杆菌的工程菌,都是改造之后的,用途不一样,前者就是一般的扩增载体的菌,也就是将载体转化进DH5α,载体可以高拷贝复制;而BL21则是进行蛋白表达用的。。。
4楼2011-08-12 09:58:52
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匿名

用户注销 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★
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loveskyzhou(金币+1): 非常感谢 2011-08-12 15:55:39
西瓜(金币+4): Good 2011-08-12 18:10:28
本帖仅楼主可见
5楼2011-08-12 15:50:22
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铅钋锶钇

银虫 (初入文坛)


★ ★ ★
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dhd997(金币+2): 很活跃啊,鼓励之 2011-08-24 10:56:25
一般两种菌都可以用来做表达的,很多文献上就是用的DH5a表达的,
6楼2011-08-24 09:46:13
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longage.gene

银虫 (小有名气)


★
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都能表达,只是个量的问题
7楼2011-08-24 11:15:39
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雨独步

铁杆木虫 (著名写手)


★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
好像是跟质粒在两者中的稳定性有关吧,记不清了。。。
8楼2011-08-24 14:40:31
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小小技术官

木虫 (正式写手)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
只知道 一个适合克隆,一个适合表达,还是从默克蛋白手册上学的。
9楼2012-10-19 00:11:15
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
作为常用的克隆菌株,DH5α是RecA1缺陷型,减少DNA非特异性重组。而且,它无核酸内切酶I活性,使外源DNA更加稳定。质粒可达高拷贝数,提取的质粒也更纯。此外还以用蓝白斑筛选。
BL21常用做表达是因为它缺失一些蛋白酶活性,可以使目的蛋白在菌体大量表达富集。
10楼2012-10-19 09:23:26
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