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疯狂修行者木虫 (正式写手)
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荧光定量怎么成了这样
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我跑了荧光定量怎么撇腿呢？哪位大侠帮解决一下，谢谢。 |
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【答案】应助回帖
疯狂修行者(金币+2): 谢谢，我降低反应温度试试吧，引物我设了好多了，能出单峰的就很少，现在扩增效率又低，真郁闷！ 2011-08-12 14:14:30
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本来木有时间回帖的，想想还是回答下，哥们你实验顺利了才有时间弄Journal Club，哈哈~ 扩增效率低可以从这三个方面考虑： 1.试剂部分成分，特别是荧光染料降解了。可以换新的试剂做一次看看。 2.优化反应程序：（1）降低退火温度；（2）如果你是两步法（退火和延伸一个温度），改成三步法（即：变性，退火，延伸这种传统的程序。 3.可能是模板中有PCR反应抑制剂。可以减少模板量（稀释之后再加）。荧光定量PCR很灵敏，你稀释个10倍应该没关系。 |
11楼2011-08-11 12:10:21
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疯狂修行者21楼2011-12-29 23:14:46
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23楼2012-01-13 11:27:14