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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母转化的问题
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huaren125

禁虫 (初入文坛)
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1楼 2011-07-31 09:55:54
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-31 17:51:49
huaren125(金币+1): 2011-08-01 19:29:38
酵母细胞壁厚，难破碎，菌落PCR做不出也是正常的，一般是先提取酵母基因组DNA，然后PCR验证。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-07-31 10:29:04
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wlsino

金虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2): 最近很活跃，鼓励之 2011-07-31 17:52:07
引用回帖:
1楼: Originally posted by huaren125 at 2011-07-31 09:55:54:
大家好，我最近做了几次酵母的点击转化，酵母是毕赤酵母GS115，1.5kv电击4天左右长出白色的小菌落，就是没有普通的酵母大，我挑取转接到含有G418（0.25mg/ml）YPD培养基中摇了一天后也其中有5管变浑浊啦，但我做菌 ...

最好同时作阳性对照
虽然当时费些功夫，但事后省大麻烦
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-07-31 15:12:03
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-08-01 16:33:01
huaren125(金币+1): 2011-08-01 19:29:20
huaren125(金币+3): 2011-08-03 09:42:53
本帖仅楼主可见
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4楼2011-08-01 09:11:40
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huaren125

禁虫 (初入文坛)
1949stone: 祝好运 2011-08-01 20:34:03
本帖内容被屏蔽
5楼2011-08-01 19:30:33
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兔兔yy070330

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 支持交流 2011-09-05 21:46:53
引用回帖:
1楼: Originally posted by huaren125 at 2011-07-31 09:55:54:
大家好，我最近做了几次酵母的点击转化，酵母是毕赤酵母GS115，1.5kv电击4天左右长出白色的小菌落，就是没有普通的酵母大，我挑取转接到含有G418（0.25mg/ml）YPD培养基中摇了一天后也其中有5管变浑浊啦，但我做菌 ...

如果目的片段太大的话，菌落PCR是验证不到的，要用溶菌酶先处理细胞，然后用液氮研磨后用苯酚氯仿提取酵母基因组，之后再用通用引物和自己的特异性引物进行检测。
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6楼2011-09-05 21:29:31
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beer胖

新虫 (小有名气)
酵母转化有难度
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7楼2011-09-06 08:33:44
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jingdejun

铁杆木虫 (小有名气)
以后要做这东西，学习了。
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8楼2011-09-06 20:47:48
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