应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DGGE之后的PCR P不出来了
31/1返回列表
查看: 1093  |  回复: 6
查看全部回帖 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

PAOs

木虫 (小有名气)

[求助] DGGE之后的PCR P不出来了

大家好，我做全菌的DGGE后的PCR，用的50微升的体系：
968F：2微升
1392R：2微升
DNTP（mix）：2微升
10*buffer：5微升
Mg离子：3微升
Taq酶：0.3微升

程序：94℃：5min
          94℃：30s
          55℃：30s
         72℃：30s
        72℃：10min

第一轮以溶解的DGGE胶中DNA为模板，1微升
http://good.gd/1388625.htm
http://good.gd/1388633.htm
第二轮以第一轮PCR产物为模板，1微升。
http://good.gd/1388636.htm

第一轮还好，有点条带，可第二轮不知道怎的整条泳道都是亮的。我不是很懂分子生物学，请大家支支招，万分感激。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-07-11 22:29:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biocontrol

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
PAOs(金币+10): 谢谢 2011-07-12 16:06:21
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-07-12 19:24:51
不知道楼主为什么要两次PCR？两次用一样的引物呢？！DGGE条带一次扩增就可以。第二次非特异性扩增忒强了。如果你是想测序的话，一次扩增就可以，浓度低的话，多P几管，浓缩。
赞一下(1人) 回复此楼
裸奔进行时...
2楼2011-07-11 22:40:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biocontrol

金虫 (小有名气)
其实最好的方法就是你说的，做克隆。如果第一次PCR没有条带，可以优化一下pcr条件。酒精浓缩就可以把。试剂盒更好。
赞一下 回复此楼
裸奔进行时...
4楼2011-07-12 17:04:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 PAOs 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭