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friya0910

新虫 (正式写手)

[交流] 质粒是否需要酶切后再电泳? 已有5人参与

将连接有目的片段的质粒做双酶切,跑电泳的时候想加一个空质粒,那这个空质粒是不是应该先单酶切一下啊?不然跑出来的不是线性的话就和前面双酶切的就没有可比性了啊?
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friya0910

新虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-07-04 23:07:02:
空载体上没有你那两个酶切位点你当初怎么做的连接呢?

我现在只是把目的片段连接到了pMD19-T载体上,还没做到双酶切重组质粒这一步,我现在就想把目的片段从pMD19-T载体上切下来,切完之后跑胶需不需要加一个空载体做对照啊?还是只要切的目的片段大小差不多就行啊?还有一个问题是我才发现pMD19-T载体在TA克隆位点后居然有我的下游引物的酶切位点BamHI 这样会不会影响酶切啊?最后双酶切以后会是3条带吗?
7楼2011-07-05 12:56:48
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toxicpeach

木虫 (正式写手)


西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-07-05 00:37:34
空载体也双酶切了,这样才是最恰当的对照
海纳百川有容乃大,壁立千尺无欲则刚
2楼2011-07-04 21:32:53
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friya0910

新虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by toxicpeach at 2011-07-04 21:32:53:
空载体也双酶切了,这样才是最恰当的对照

可是空载体上没有那两个酶切位点啊!
3楼2011-07-04 21:43:44
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+4): Good! 2011-07-05 00:40:09
你的对照做的有问题,你是双酶切重组载体,所以对照应该是双酶切的空载体和双酶切的基因,加上你酶切的重组载体,如果切下的两个片段和对照一样大,那么就没问题啦。。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-07-04 23:05:53
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