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pgldwx062

禁虫 (小有名气)

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三尺百度豆豆

新虫 (初入文坛)

不用,曲线可以对不同蛋白通用,应该是问题不大
豆豆在哪里,我在找你
3楼2011-07-05 00:05:03
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lxfbsh2003

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

pgldwx062(金币+2): 我用这种方法比较方便,还是谢谢你~ 2011-07-04 22:56:00
我建议不用。如你所说从反应机理上可以知道。
这种方法测得是总蛋白含量,请问你测定的样品中只含有你的目标蛋白吗?如果你想要目标蛋白的含量,你可以换种检测方法,试试用ELISA法测试。
2楼2011-07-04 21:25:55
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+5, EPI+1): 谢谢参与 2011-07-05 09:02:25
pgldwx062(金币+3): 分析的很透彻啊~谢谢啦 2011-07-05 10:14:51
一、BSA作为蛋白质含量标准曲线的要求
1、易于获得
    它是牛血清中的简单蛋白,是血液的主要成分(38g/100ml),含量高,易于获得,杀一头牛都不知道能得到多少了,而且提取纯化也容易。是来源和纯化都成本很低的蛋白质。
2、氨基酸含量较全
    含有16种氨基酸,虽然不全,但也差不多了。由581个氨基酸残基组成(可能不同来源的BSA稍有不同),其中35个半胱氨酸组成17个二硫键,在肽链的第34位有一自由巯基。不同的测定方法的原理都不同,但是氨基酸残基多的蛋白质可以对多种测定方法起反应。

3、分子量适中
    溶菌酶属于最小的酶,才约10KD,BSA的分子量约68KD,在蛋白质单体里不大不小。BSA是较对称的心形蛋白质,蛋白质的大小不同,氨基酸个数和蛋白质表面积的比值是不同的,分子量适中的蛋白质在蛋白质含量中具有代表性。

二、用某种酶作为标准曲线所用的标准蛋白质存在难度
    对照上面三点,就知道困难主要有哪些了。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜素论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2011-07-05 02:25:44
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

你首先要纯化的酶不一定易于获得,那么从哪里拿你的酶来作为标准品?从什么公司买的不一定完全纯,可能还有杂质,可以买来跑一下电泳。

这个是最主要的问题。你也不需要重新采用种酶来绘制一个标准曲线,BSA有代表性的。
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5楼2011-07-05 02:30:30
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