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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 考马斯亮蓝法测蛋白质含量
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pgldwx062

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1楼 2011-07-04 17:02:18
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+5, EPI+1): 谢谢参与 2011-07-05 09:02:25
pgldwx062(金币+3): 分析的很透彻啊~谢谢啦 2011-07-05 10:14:51
一、BSA作为蛋白质含量标准曲线的要求
1、易于获得
    它是牛血清中的简单蛋白，是血液的主要成分（38g/100ml），含量高，易于获得，杀一头牛都不知道能得到多少了，而且提取纯化也容易。是来源和纯化都成本很低的蛋白质。
2、氨基酸含量较全
    含有16种氨基酸，虽然不全，但也差不多了。由581个氨基酸残基组成（可能不同来源的BSA稍有不同），其中35个半胱氨酸组成17个二硫键，在肽链的第34位有一自由巯基。不同的测定方法的原理都不同，但是氨基酸残基多的蛋白质可以对多种测定方法起反应。

3、分子量适中
    溶菌酶属于最小的酶，才约10KD，BSA的分子量约68KD，在蛋白质单体里不大不小。BSA是较对称的心形蛋白质，蛋白质的大小不同，氨基酸个数和蛋白质表面积的比值是不同的，分子量适中的蛋白质在蛋白质含量中具有代表性。

二、用某种酶作为标准曲线所用的标准蛋白质存在难度
    对照上面三点，就知道困难主要有哪些了。
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4楼2011-07-05 02:25:44
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
你首先要纯化的酶不一定易于获得，那么从哪里拿你的酶来作为标准品？从什么公司买的不一定完全纯，可能还有杂质，可以买来跑一下电泳。

这个是最主要的问题。你也不需要重新采用种酶来绘制一个标准曲线，BSA有代表性的。
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5楼2011-07-05 02:30:30
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶
引用回帖:
2397761楼: Originally posted by ningda47 at 2012-05-06 17:58:09:
你好，我有的磷酸是溶液，分析纯，含量大于等于85%，不知能不能用来配考马斯亮蓝

你好，我很久不用考染了，忘记了。
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7楼2012-05-06 21:31:22
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生物大分子降解酶
引用回帖:
2451843楼: Originally posted by TonyGeN at 2012-10-29 22:41:02
问一个哥儿们
我现在采用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
现在就有点纠结牛血清白蛋白到底该买哪种的，影响大不大，国药的行不行？能推荐一个常用的品牌么？谢谢...

我用进口的，不过国内的应该也可以，也有人用的。
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9楼2012-10-30 20:50:40
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生物大分子降解酶
引用回帖:
11楼: Originally posted by 995725768 at 2014-02-28 15:12:40
请问对牛血清白蛋白的纯度有要求吗？去哪里买呢？...

标准品当然是越纯越好的，大品牌的商品比较有公信力，比如sigma什么的。不用预先测定含量，因为要是大品牌的都这么差，就不用开公司了。
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13楼2014-02-28 21:27:43
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