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ghj042

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物不到200bp条带模糊

大家看看怎么回事,回收后进行了PCR,出现了这样的情况,从做到右退火温度依次为45,50,55,60.下面的那个是不是引物二聚体?这样的条带能回收吗?
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ghj042

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by healerly at 2011-07-03 14:52:27:
60摄氏度的比较好吧~~
可以回收,建议:不过需要切胶回收,电泳时电压调的稍微小一点,跑的时间长一点,可能电泳液需要换了,一般要回收的话最好用新的电泳液,不然要是有拖尾就不好了,就想你现在跑的,稍微有点 ...

这样稍微有点拖尾的话能够用来回收吗?会影响连接和测序吗?
7楼2011-07-03 21:50:33
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查看全部 11 个回答

healerly

禁虫 (小有名气)

★ ★
ghj042(金币+1): 谢谢,很有帮助,我回收试试 2011-07-03 15:54:53
dhd997(金币+2): good 2011-07-03 18:11:30
本帖内容被屏蔽

2楼2011-07-03 14:52:27
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-03 18:11:39
退火用60度,建议回收的时候用高浓度胶(如2.0%)跑,这样目的条带和引物二聚体分的比较开。
3楼2011-07-03 17:38:23
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-07-03 21:38:31
1:marker各是多大呢?最好标清楚;
2:选最右边的进行大量pcr。。这样的情况可以调整胶的浓度,改变电压,但是我的经验是切胶,因为200bp确实很小,引物二聚体也比较小,切胶的话比较纯,可以得到你的目的条带。。也很方便。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-07-03 19:58:12
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