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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物不到200bp条带模糊
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ghj042

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物不到200bp条带模糊

大家看看怎么回事，回收后进行了PCR，出现了这样的情况，从做到右退火温度依次为45,50,55,60.下面的那个是不是引物二聚体？这样的条带能回收吗？
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1楼 2011-07-03 11:46:51
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ghj042

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by healerly at 2011-07-03 14:52:27:
60摄氏度的比较好吧~~
可以回收，建议：不过需要切胶回收，电泳时电压调的稍微小一点，跑的时间长一点，可能电泳液需要换了，一般要回收的话最好用新的电泳液，不然要是有拖尾就不好了，就想你现在跑的，稍微有点 ...

这样稍微有点拖尾的话能够用来回收吗？会影响连接和测序吗？
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7楼2011-07-03 21:50:33
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healerly

禁虫 (小有名气)
★ ★
ghj042(金币+1): 谢谢，很有帮助，我回收试试 2011-07-03 15:54:53
dhd997(金币+2): good 2011-07-03 18:11:30
本帖内容被屏蔽
2楼2011-07-03 14:52:27
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-03 18:11:39
退火用60度，建议回收的时候用高浓度胶（如2.0%）跑，这样目的条带和引物二聚体分的比较开。
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3楼2011-07-03 17:38:23
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-07-03 21:38:31
1：marker各是多大呢？最好标清楚；
2：选最右边的进行大量pcr。。这样的情况可以调整胶的浓度，改变电压，但是我的经验是切胶，因为200bp确实很小，引物二聚体也比较小，切胶的话比较纯，可以得到你的目的条带。。也很方便。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-07-03 19:58:12
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