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zqt123_1981

木虫 (小有名气)

[交流] 已知基因全长,克隆构建表达载体已有5人参与

目的基因在Genbank有mRNA全长序列,我想把它克隆出来构建表达载体,1 atggctgtag cggaggaact gagaaacgct ccacgtgcaa agggtccggc caccatccta。。。。。。
1141 actgttgtgc tgcatagcat tcctacaatt acaaattaa。请问怎样设计引物克隆全长??pGM-T载体的话还用添加酶切位点与保护碱基吗?有同仁说直接从头尾各选一定长度的碱基就可以吗?怎样验证啊

[ Last edited by zqt123_1981 on 2011-7-7 at 11:22 ]
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lousulin

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
设计引物很简单的,有相关软件,不用软件自己看着序列设也可以,注意Tm值,引入酶切位点,最好加上几个保护碱基。长度20几个bp就OK啦。
6楼2011-07-01 00:36:16
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