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lingxingcao

新虫 (小有名气)

[求助] Q-PCR的曲线聚集在了一起是怎么回事啊

昨天做的Q-PCR结果还蛮好的,结果今天跑出来的曲线图都聚集到了一起是怎么回事啊?按稀释倍数稀释的样品怎么跑出来的曲线都聚集到了一起?
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)


1949stone(金币+1): 最近辛苦你了 2011-06-28 18:26:19
CT值如何?
2楼2011-06-28 18:24:38
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beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good! 2011-06-29 09:33:11
lingxingcao(金币+3): 谢谢 2011-06-29 10:01:16
lingxingcao(金币+2): 非常感谢 2011-06-30 17:03:17
引用回帖:
Originally posted by lingxingcao at 2011-06-28 16:22:30:
昨天做的Q-PCR结果还蛮好的,结果今天跑出来的曲线图都聚集到了一起是怎么回事啊?按稀释倍数稀释的样品怎么跑出来的曲线都聚集到了一起?

这个问题可能的原因:
1:污染的可能性比较大
2:加样的误差比较大(这个熟练的情况下不易出现)
3:可能是没有混匀
不知道你是用什么稀释的,用ddH2O稀释的话效果会不好,一般用TE稀释稍微好些,但最好的还是要一种叫着EASY Dilution的稀释液,可以从TAKARA公司购买,打半价的时候大概是300元(6ml),实际上也是一种TE,不过通常比我们自己配的要好些,再梯度稀释中能够很好的将DNA混匀,看看下图的标准曲线情况
一是EASY Dilution稀释的 二是TE(pH8.0)稀释的(供参考下,用水稀释肯定不怎么准确,特别是稀释到好几个梯度以后)



3楼2011-06-29 00:24:57
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