[求助] Q-PCR的曲线聚集在了一起是怎么回事啊

昨天做的Q-PCR结果还蛮好的，结果今天跑出来的曲线图都聚集到了一起是怎么回事啊？按稀释倍数稀释的样品怎么跑出来的曲线都聚集到了一起？

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1楼 2011-06-28 16:22:30

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引用回帖:

Originally posted by lingxingcao at 2011-06-28 16:22:30:
昨天做的Q-PCR结果还蛮好的，结果今天跑出来的曲线图都聚集到了一起是怎么回事啊？按稀释倍数稀释的样品怎么跑出来的曲线都聚集到了一起？

这个问题可能的原因：
1：污染的可能性比较大
2：加样的误差比较大（这个熟练的情况下不易出现）
3：可能是没有混匀
不知道你是用什么稀释的，用ddH2O稀释的话效果会不好，一般用TE稀释稍微好些，但最好的还是要一种叫着EASY Dilution的稀释液，可以从TAKARA公司购买，打半价的时候大概是300元（6ml）,实际上也是一种TE，不过通常比我们自己配的要好些，再梯度稀释中能够很好的将DNA混匀，看看下图的标准曲线情况
一是EASY Dilution稀释的二是TE（pH8.0)稀释的（供参考下，用水稀释肯定不怎么准确，特别是稀释到好几个梯度以后）

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3楼2011-06-29 00:24:57