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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于在表达蛋白和GFP蛋白之间的linker
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丫头7976

铜虫 (正式写手)

[求助] 关于在表达蛋白和GFP蛋白之间的linker

各位好，我最近在做膜蛋白的表达，在构建载体的时候我在膜蛋白的C端还加了GFP指示蛋白，但是在诱导表达后，根本看不到菌发出绿色荧光，而我只表达GFP时却能看到菌是绿色的，我在构建载体的时把膜蛋白和GFP直接连在一起了，中间没有加linker regions，我想问一下各位，我的菌株看不出绿色的原因是不是我没有加一个linker的原因呢，如果有做过这方面的大侠是不是可以知道一下我呢，多谢各位！
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1楼2011-06-03 19:13:02
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roomofxw

木虫 (正式写手)
我随便敲敲键盘的啊
SDS-PAGE确定GFP是否表达了，或者融合蛋白表达量很低
膜蛋白具有疏水区域，倾向于形成聚集体，聚集有可能造成GFP功能丧失，甚至性成包涵体。
双阅读框共表达目的蛋白和GFP，确认目的蛋白特性是否对GFP有影响。
另外我做过大肠和酵母表达GFP，肉眼是可以观察到绿色菌体
但是如果表达量比较低的情况下，我认为还是需要荧光显微镜的
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10楼2011-11-30 11:47:31
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