应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » GFP发光稳定性
61/1返回列表
查看: 1882  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] GFP发光稳定性

有没有虫子们表达过EGFP，文献报道EGFP发光很稳定。我用BL21表达EGFP，纯化后，在10mMTris-Cl，pH7.4，100mM NaCl缓冲液中，ex：488 nm，em：510 nm， 每5min测一个点，发现在2h后，荧光强度只有初始值的65%了。哪位大虾知道其中的原因，请指教哈，鄙人不胜感激。
   最近做了对照实验，发现酶标板的吸附也导致荧光强度降低。用BSA封闭的酶标板测试的结果是，1h降低了10%左右，这个不知道算不算还比较稳定呢。

[ Last edited by 更深的蓝 on 2011-5-11 at 17:39 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-05-09 08:50:12
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小_木虫

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我们构建过带GFP标记的载体，没有问题，很稳定。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-05-09 08:53:42
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 小小_木虫 at 2011-05-09 08:53:42:
我们构建过带GFP标记的载体，没有问题，很稳定。

你做过体外测试EGFP的稳定性吗
赞一下 回复此楼
3楼2011-05-09 10:00:19
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小_木虫

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
更深的蓝(金币+1): 2011-05-10 10:00:32
引用回帖:
Originally posted by 更深的蓝 at 2011-05-09 10:00:19:
你做过体外测试EGFP的稳定性吗

体外没有测试过，我们只是构建好了之后转入大肠杆菌或者枯草芽孢杆菌中，看荧光的表达，用来标记菌体。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-05-10 08:52:39
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuqiushi

至尊木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
更深的蓝(金币+1): 谢谢交流 2011-05-10 10:01:06
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-05-11 18:40:11
我们做过EGFP的体外检测，不过我们只是将其做为指示剂，与我们的目的基因一起构建重组载体，来检测我们的转基因效果。不过在检测的过程中也会发现荧光强度的下降，考虑可能是绿色荧光蛋白降解所致，仅供参考
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-05-10 09:15:15
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lstt09nk(金币+2): 很热心 2011-05-11 18:40:21
可能在你检测的时候存在有激光照射引起的降解
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2011-05-11 08:46:57
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 更深的蓝 的主题更新
61/1返回列表
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +7 羊腰板 2026-08-21 7/350 2026-08-21 21:28 by iwuli
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 12/600 2026-08-21 19:46 by kulium
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +23 yaoyewhu2008 2026-08-20 25/1250 2026-08-21 12:19 by Poppy1104
[基金申请] 什么时候开奖？ +7 CrisMessi 2026-08-18 7/350 2026-08-21 12:15 by weiyin
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭