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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » GFP发光稳定性
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] GFP发光稳定性

有没有虫子们表达过EGFP，文献报道EGFP发光很稳定。我用BL21表达EGFP，纯化后，在10mMTris-Cl，pH7.4，100mM NaCl缓冲液中，ex：488 nm，em：510 nm， 每5min测一个点，发现在2h后，荧光强度只有初始值的65%了。哪位大虾知道其中的原因，请指教哈，鄙人不胜感激。
   最近做了对照实验，发现酶标板的吸附也导致荧光强度降低。用BSA封闭的酶标板测试的结果是，1h降低了10%左右，这个不知道算不算还比较稳定呢。

[ Last edited by 更深的蓝 on 2011-5-11 at 17:39 ]
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1楼 2011-05-09 08:50:12
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小小_木虫

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我们构建过带GFP标记的载体，没有问题，很稳定。
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2楼2011-05-09 08:53:42
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 小小_木虫 at 2011-05-09 08:53:42:
我们构建过带GFP标记的载体，没有问题，很稳定。

你做过体外测试EGFP的稳定性吗
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3楼2011-05-09 10:00:19
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小小_木虫

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
更深的蓝(金币+1): 2011-05-10 10:00:32
引用回帖:
Originally posted by 更深的蓝 at 2011-05-09 10:00:19:
你做过体外测试EGFP的稳定性吗

体外没有测试过，我们只是构建好了之后转入大肠杆菌或者枯草芽孢杆菌中，看荧光的表达，用来标记菌体。
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4楼2011-05-10 08:52:39
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zhuqiushi

至尊木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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更深的蓝(金币+1): 谢谢交流 2011-05-10 10:01:06
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-05-11 18:40:11
我们做过EGFP的体外检测，不过我们只是将其做为指示剂，与我们的目的基因一起构建重组载体，来检测我们的转基因效果。不过在检测的过程中也会发现荧光强度的下降，考虑可能是绿色荧光蛋白降解所致，仅供参考
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5楼2011-05-10 09:15:15
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lstt09nk(金币+2): 很热心 2011-05-11 18:40:21
可能在你检测的时候存在有激光照射引起的降解
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6楼2011-05-11 08:46:57
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