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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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margersy113

新虫 (正式写手)

[求助] 液相测定 分不开的峰 怎么办??谢谢大家了。。

分不开的峰!
本人现在在用HPLC-ECD检测6-OHDA。
文献流动相是:25mM柠檬酸,125mM磷酸钠(文献中写的是sodium phosphate),100mg/lEDTA,30mg/lSOS,配置好后用磷酸调节pH至2.5。
在我的实际操作中,先后试过pH=3.0, 3.5, 3.8, 4.1。出峰时间基本在4-6分之间(其中pH3.8出峰时间相对最好,在5-6分之间,而且出峰时间随着时间的进行一点一点往后移,这也是我很纠结的地方,怀疑是我操作问题,但找不到原因),但是我们测实际脑样品时,出现了一个大峰,时间从2分持续到5分(有拖尾现象),这样就影响到了6-OHDA,我们无法判断到底是不是6-OHDA。

后来我改了流动相:125mM柠檬酸(原来是25mM),125mM磷酸钠(文献中写的是sodium phosphate),100mg/lEDTA,30mg/lSOS,配置好后用磷酸调节pH至3.5。我检测了只有6-OHDA的样品,很奇怪,在 4-5分出了一个峰,11-12分出了一个峰,4针都是这样。然后我进了添加了6-ohda的脑样本,之前说的大峰倒是没有了,但是变成一个一个小峰(2-6分之间),而且11-12分的6-OHDA也没有出现,还是无法判断6-OHDA.
我很迷茫现在,我不知道我应该如何改进方法。
请各位大侠帮忙
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margersy113

新虫 (正式写手)

有知道的吗??
2楼2011-05-31 09:28:01
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kkbyb

木虫 (著名写手)

复杂的流动相啊,应该是USP类的方法,既然pH调2.5所以确定文献中的不是磷酸钠,应该是2氢钠(只写sodium phosphate的作者很缺德,这只能算半个试剂名,磷酸钠的准确写法都是单碱-,双碱-,碱式-),没有方法的确定峰位首先都要走一个全梯度来看,浓度在100ug/mL
3楼2011-05-31 14:04:04
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