Western blot
丽春红染色已经确定转膜成功了，但是孵育后显色没有条带。
我介绍一下我的实验过程：
一抗：Anti-His-HRP
二抗：HRP-Rabbit-Anti-Mouse lgG
一抗，二抗都是用封闭液按1:5000稀释
使用的溶液如下（按照抗体说明书配制的）：
PBS 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 1.8mM KH2PO4
PBSTPBS +0.05% Tween-20,v/v)
Blocking buffer PBST + 5% nonfat, dry milk, w/v)
孵育时，我把膜放到一个塑料样品袋中，然后加入抗体稀释剂，一抗过夜孵育，二抗孵育一小时，这样在样品袋中孵育是不是不利于抗体与膜上蛋白的结合，对孵育效果产生影响？怎样结合效果才好呢？
显色步用的是 3%的4-氯-1-萘酚+30%双氧水+50mM的Tris-Hcl 室温下浸泡震荡大约30分钟（也是根据抗体说明书上面的方法）。
希望大家帮助啊！
[ Last edited by 烂铁 on 2011-5-25 at 14:22 ] |
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