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491959728

铁虫 (小有名气)

[求助] DGGE电泳的问题

DGGE电泳需要欲电泳么？欲电泳是在上样前还是在上样后？欲电泳和正式电泳的电压和时间分别是多少？
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1楼 2011-05-23 14:23:17
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xiadongliang

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励 2011-05-24 23:23:39
预电泳在上样前，200V，10min即可。
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2楼2011-05-23 14:57:06
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caisanrenju

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 很有经验啊，专家指数是必须给您的！ 2011-05-24 23:24:15
491959728(金币+5): 2011-05-29 19:28:25
最好预电泳一下，条带可以更漂亮。电泳前，按照你正式电泳时的电压预电泳30min。
正式电泳我一般用75V，14h，电压低的话条带会较漂亮。我们实验室的一个经验是
：电压X时间（h）=1000，这会是一个比较好的条件。当然还要根据聚丙烯酰胺胶的浓度，8%是比较合适的。
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3楼2011-05-24 23:16:14
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良缘百合

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by caisanrenju at 2011-05-24 23:16:14:
最好预电泳一下，条带可以更漂亮。电泳前，按照你正式电泳时的电压预电泳30min。
正式电泳我一般用75V，14h，电压低的话条带会较漂亮。我们实验室的一个经验是
：电压X时间（h）=1000，这会是一个比较好的条件。 ...

真是太感谢了！
从本科后就没做过微观方面的实验，有个可能比较弱智的问题需要跟你请教下：为什么是在上样前预电泳呢？
上两个星期，我一直是在上样后200伏预电泳20min，80伏跑过夜，条带一直分不开，而且不清晰，可纠结了……
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爱家人爱学习爱生活
4楼2011-05-25 07:40:19
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caisanrenju

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-04 18:00:40
预电泳的目的是，不要让胶中的部分杂质影响到条带的电泳，使其预先跑出胶。
条带分不开，不一定是电泳时间和电压的问题，你可以分析:1.胶的变性范围是否合适2.聚丙烯酰胺胶的浓度是否偏大或小3.DNA提取和PCR条件是否造成严重偏好性
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5楼2011-05-25 22:04:23
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491959728

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by caisanrenju at 2011-05-25 22:04:23:
预电泳的目的是，不要让胶中的部分杂质影响到条带的电泳，使其预先跑出胶。
条带分不开，不一定是电泳时间和电压的问题，你可以分析:1.胶的变性范围是否合适2.聚丙烯酰胺胶的浓度是否偏大或小3.DNA提取和PCR条件 ...

预电泳在上样前？200V电泳10MIN可以吗？欲电泳时的温度也要在60度？
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6楼2011-07-04 17:32:21
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caisanrenju

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 491959728 at 2011-07-04 17:32:21:
预电泳在上样前？200V电泳10MIN可以吗？欲电泳时的温度也要在60度？

之所以为预，预电泳在上样前是肯定的！
至于预电泳的条件，我的理解是（Bio-Rad说明书上也这么写）既然是预电泳就要跟正式电泳的条件一样，当然也包括温度。对于很多人说的200V 10min，我不好说这样不对，但至少我不知道这么做的原因是什么。

个人经验，希望对你有帮助
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7楼2011-07-05 08:15:21
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zhang226296

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by caisanrenju at 2011-05-25 22:04:23
预电泳的目的是，不要让胶中的部分杂质影响到条带的电泳，使其预先跑出胶。
条带分不开，不一定是电泳时间和电压的问题，你可以分析:1.胶的变性范围是否合适2.聚丙烯酰胺胶的浓度是否偏大或小3.DNA提取和PCR条件是 ...

我的片段230bp左右，为什么不管8%，40-60%，50-70%都是这样，上面没有条带，下面又密呢，求指点啊
DGGE电泳的问题
GDO@T_C6}IBUIK206~TF5~9.jpg
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8楼2014-04-14 10:34:44
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