应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 载体酶切
141/2返回列表12下一页
查看: 2728  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

meizishu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢
1楼 2011-05-20 20:52:46
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabxxh

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone(EPI+1): 来也 2011-05-21 12:39:37
呵呵，这个问题我以前遇见过。
既然你的对照质粒能跑出来，那说明质粒没问题。
为什么单酶切和双酶切都没有了呢，我们通常叫切碎了，因为你说的很简单，并没有给出酶切体系中各个成分的数据，以及酶切时间，哪个公司的何种内切酶，笼统分析如下：
1.你用的酶有星号活性，而你采用的是10ul体系，枪头随便沾上一点内切酶就会过量，尤其你做双酶切的时候，酶过量的结果就是甘油的浓度过大，然后内切酶产生星号活性，切碎了你的质粒。
2.你的酶切时间过长，切碎这种情况通常发生在过夜酶切的时候，中间的原因我就不说了，如果只是鉴定的话，建议快速内切酶酶切30min，普通内切酶3h。
3.你用的是快速内切酶，酶切时间过长。切碎的情况常见于快速内切酶，普通的也有，但是我和不幸的没有遇到过。
4.你没有好好研究内切酶说明书，忽略了说明书上的注意事项。
5.最不可能的情况，你选错了温度。
以上，好运
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-05-21 09:28:09
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

272401213

木虫 (正式写手)
顶楼上！
回复此楼
YNWA
3楼2011-05-21 09:45:44
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

deblway

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
额。。。个人感觉楼主给的信息太少。。对照质粒的量（不是体积,大概多少ng）和酶切时用的都是多少。。。至于星活性会将质粒切的那么碎表示怀疑。。当然除非是时间超级长。。但我估计那么长时间酶活性也没了。。
赞一下(1人) 回复此楼
海贼王！哥当定了。。。。
4楼2011-05-21 15:45:20
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whiskyxy

金虫 (正式写手)
接着往下做做呗
回复此楼
5楼2011-05-21 16:29:04
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meizishu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
6楼2011-05-22 09:24:21
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meizishu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
7楼2011-05-22 09:26:42
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meizishu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
8楼2011-05-23 20:22:23
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang304

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-05-23 22:23:21
引用回帖:
Originally posted by meizishu at 2011-05-22 09:24:21:
非常感谢您的回复！
DNA 5ul （从条带的亮度程度来估计的话，大约有25ng）
E1（takara的Hind III）:0.1ul
E2（takara的Kpn I）:0.1ul
buffer：1ul
ddH2O补足至10ul
酶切1h，37°。
选用10ul体系酶切就是 ...

一、紫外分光光度计测下DNA浓度计算质粒的量，选好两种酶兼容的buffer，Hind III单酶切应该没问题。如有，考虑提取的质粒有问题，建议重提质粒再做双酶切。
二、考虑下可能质粒根本就不是阳性质粒。
赞一下(2人) 回复此楼
9楼2011-05-23 21:19:19
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

juaipingdong
10楼2011-05-23 21:22:37
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 meizishu 的主题更新
141/2返回列表12下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自然面上和省基金B类撒花 +16 花田半亩～白 2026-04-21 16/800 2026-04-23 03:04 by 魅力紫翼
[考研] 有没有学校收留 +3 蒋昌鹏qtj 2026-04-20 3/150 2026-04-22 20:25 by 学员JpLReM
[考研] 312求调剂 +3 山河似你温柔 2026-04-22 3/150 2026-04-22 20:17 by 学员JpLReM
[考博] 华师大读博 +3 xq83 2026-04-22 5/250 2026-04-22 10:42 by xq83
[教师之家] 又一批高校组建人工智能学院 师资行吗 不是骗人吗 +5 yexuqing 2026-04-19 5/250 2026-04-22 10:01 by easeheart
[论文投稿] 急需审稿人！！！ +3 陆小果画大饼 2026-04-21 3/150 2026-04-21 23:54 by jzy_123456
[考研] 295分求调剂 +6 ?要上岸? 2026-04-17 6/300 2026-04-21 08:18 by Equinoxhua
[考研] 085600材料与化工调剂 5+3 孜孜不倦2002 2026-04-19 6/300 2026-04-20 21:25 by babero
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 7/350 2026-04-20 15:45 by 豆豆7758
[考研] 337求调剂 +3 jyz04 2026-04-18 3/150 2026-04-20 12:24 by 研可安
[考博] 申博 +3 Xyyx. 2026-04-18 3/150 2026-04-20 10:44 by YuY66
[考研] 求计算机方向调剂 +3 Toffee2 2026-04-16 6/300 2026-04-19 22:37 by ll叶
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭