24小时热门版块排行榜    

查看: 3119  |  回复: 13
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

meizishu

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meizishu

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

6楼2011-05-22 09:24:21
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

yabxxh

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
1949stone(EPI+1): 来也 2011-05-21 12:39:37
呵呵,这个问题我以前遇见过。
既然你的对照质粒能跑出来,那说明质粒没问题。
为什么单酶切和双酶切都没有了呢,我们通常叫切碎了,因为你说的很简单,并没有给出酶切体系中各个成分的数据,以及酶切时间,哪个公司的何种内切酶,笼统分析如下:
1.你用的酶有星号活性,而你采用的是10ul体系,枪头随便沾上一点内切酶就会过量,尤其你做双酶切的时候,酶过量的结果就是甘油的浓度过大,然后内切酶产生星号活性,切碎了你的质粒。
2.你的酶切时间过长,切碎这种情况通常发生在过夜酶切的时候,中间的原因我就不说了,如果只是鉴定的话,建议快速内切酶酶切30min,普通内切酶3h。
3.你用的是快速内切酶,酶切时间过长。切碎的情况常见于快速内切酶,普通的也有,但是我和不幸的没有遇到过。
4.你没有好好研究内切酶说明书,忽略了说明书上的注意事项。
5.最不可能的情况,你选错了温度。
以上,好运
2楼2011-05-21 09:28:09
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

deblway

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
额。。。个人感觉楼主给的信息太少。。对照质粒的量(不是体积,大概多少ng)和酶切时用的都是多少。。。至于星活性会将质粒切的那么碎表示怀疑。。当然除非是时间超级长。。但我估计那么长时间酶活性也没了。。
海贼王!哥当定了。。。。
4楼2011-05-21 15:45:20
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meizishu

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

7楼2011-05-22 09:26:42
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +5 bjdxyxy 2026-08-26 5/250 2026-09-01 17:54 by 小伟大博士
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 7/350 2026-09-01 15:18 by myrtle
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +4 瞬息宇宙 2026-08-31 4/200 2026-09-01 14:58 by jiaoxg
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
信息提示
请填处理意见