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qiang7金虫 (小有名气)
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[求助]
Western Blot电泳蛋白质外漏问题求助
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求助各位高手指点，本人最近蛋白电泳过程中经常出现在蛋白样品刚跑离样品孔还没进入分离胶的时候，样品就漏下来了！如下图所示。在我想的问题都找遍了，比如浓缩胶浓缩时间，玻璃板清洗问题及玻璃板都换新的了，还有试剂都换了一套，还是漏 真不知道还有什么致命因素没有找到，请各位大侠指点！小弟将不胜感激！ |
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 蛋白质生物学实验经验 | 核酸生物学实验经验 | 蛋白电泳 漏样 |
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【答案】应助回帖
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qiang7(金币+2): 您说的这些都注意到了 2011-05-22 10:47:35
adslye(金币+1): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-09-26 09:11:43
qiang7(金币+2): 您说的这些都注意到了 2011-05-22 10:47:35
adslye(金币+1): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-09-26 09:11:43
| 这个问题我也遇到过，后来解决了。首先分离胶水封或者异丙醇封得时候不能干，也就是说分离胶和浓缩胶之间的界面不能干，这两个界面很容易有空隙，进入空气一般就会漏孔。再有就是梳子是不是太紧？梳子太紧容易造成拔梳子的时候将浓缩胶带起来，和分离胶分离了有空隙。再有就是玻板是不是新的？新的上面有一层油，要洗干净，否则，胶和板之间容易不紧，造成漏胶。我认为试剂应该没有太大问题，如果是一直使用的试剂。检查一下细节问题吧。 |
7楼2011-05-21 23:23:13
qiang7
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2楼2011-05-18 10:34:23
xuguanghai
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【答案】应助回帖
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qiang7(金币+1): 浓缩胶都浓缩了近1h了 还有没有什么关键因素啊？ 2011-05-18 11:11:22
adslye(金币+1): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-09-26 09:11:13
qiang7(金币+1): 浓缩胶都浓缩了近1h了 还有没有什么关键因素啊？ 2011-05-18 11:11:22
adslye(金币+1): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-09-26 09:11:13
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会不会是分离胶中的聚丙酰胺没有聚合，蛋白没有孔径进入分离胶，一般30分钟左右分离胶都能聚合，TEMED的量不能太多，只是起加速聚合作用，多的话会使胶变硬，变脆，胶容易裂开，蛋白肯定就跑不进孔径里了。觉得可能还是胶那里出了问题。 http://www.app17.com/dating/d805.html |
3楼2011-05-18 10:47:56
qiang7
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4楼2011-05-18 11:04:13
