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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 材料表征测试 » FITC标记蛋白中的Sephadex G25柱
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梦想与现实共舞

木虫 (正式写手)

[求助] FITC标记蛋白中的Sephadex G25柱

我想用荧光标记蛋白，现在从网上找到一些实验方法大致相同，其中最后一步都是用Sephadex G25柱除去游离荧光素，有的在这一步前面有加透析，有的没有。我现在的疑问是Sephadex G25柱除了可以除去游离的荧光素，还有什么作用？我知道透析可以将小分子的FITC除去，如果Sephadex G25柱仅是除FITC，那么用透析不就可以了吗？非得要用Sephadex G25柱吗?
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1楼 2011-05-17 14:57:12
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ashui001

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lixiangde(金币+2): 感谢回帖交流 2011-05-19 18:08:21
梦想与现实共舞(金币+10): 请问每次透析所需的溶液要有多少合适？比如5ml的溶液，透析液要多少呢？ 2011-05-19 21:56:19
G25柱和透析的目的都是除去没修饰到蛋白上的游离荧光分子，二者用一个就行了
G25柱实验时间比较短，但装柱，和检测都比较麻烦，最好有AKTA仪器做起来比较方便
透析做起来比较简单，根据你的蛋白和荧光素的分子量选择适当分子量的透析袋，透析1-2天也几乎能去除游离的荧光分子，透析溶液要用蛋白的缓冲液，刚开始透析的时候多换几次液
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kundaobio.com,昆道生物，量子点合成、修饰及其生物医学应用，量子点荧光抗体定制和服务
2楼2011-05-19 16:19:41
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ashui001

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-05-20 09:20:32
梦想与现实共舞(金币+20): 2011-05-20 17:25:44
引用回帖:
Originally posted by ashui001 at 2011-05-19 16:19:41:
G25柱和透析的目的都是除去没修饰到蛋白上的游离荧光分子，二者用一个就行了
G25柱实验时间比较短，但装柱，和检测都比较麻烦，最好有AKTA仪器做起来比较方便
透析做起来比较简单，根据你的蛋白和荧光素的分子量 ...

5ml的用500ml或者1000ml的烧杯透析就差不多了，要能淹没透析袋，并且最好用磁子搅拌透析液，使透析袋在溶液中旋转比较好
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3楼2011-05-20 08:31:52
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梦想与现实共舞

木虫 (正式写手)
我在文献中看到的都是有用Sephadex G25柱的，如果不用发文章的时候会不会被质疑？请问你有没有相关文献是没有用Sephadex G25柱，只做到透析这一步的？
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4楼2011-05-20 17:28:31
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ashui001

木虫 (著名写手)
★
dengyfd(金币+1): 谢谢回帖交流 2011-05-21 20:38:56
这个应该不会有质疑的，透析也是很常见的除盐方法，甚至比过柱子还常见的，文献应该很多的，这是实验细节，很多都是一笔带过的
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5楼2011-05-21 09:23:53
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竹间

新虫 (小有名气)
★
markar: 金币+1, 感谢回帖交流，欢迎常来生物材料版！ 2012-06-11 09:46:12
引用回帖:
1345474楼: Originally posted by 梦想与现实共舞 at 2011-05-20 17:28:31
我在文献中看到的都是有用Sephadex G25柱的，如果不用发文章的时候会不会被质疑？请问你有没有相关文献是没有用Sephadex G25柱，只做到透析这一步的？

如果FITC过量很多的话，透析很难完全除尽，单纯用Sephadex G25效果可能也不算很理想，因此搭配使用效果会更好。另外，你可以在透析后，取透析外液检测一下看有没有FITC。
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每天做好一些简单的事，坚持下来就变得不简单了。
6楼2012-06-11 09:30:57
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宁静小合子

新虫 (初入文坛)
请问楼主是否知道如何用FITC去标记一个单链DNA？
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7楼2012-06-13 22:43:37
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baicai1487

铁虫 (小有名气)
红舟流星: 欢迎新虫来生物材料板块交流，有问题可以开新帖询问 2013-11-28 12:13:15
引用回帖:
2楼: Originally posted by ashui001 at 2011-05-19 16:19:41
G25柱和透析的目的都是除去没修饰到蛋白上的游离荧光分子，二者用一个就行了
G25柱实验时间比较短，但装柱，和检测都比较麻烦，最好有AKTA仪器做起来比较方便
透析做起来比较简单，根据你的蛋白和荧光素的分子量选 ...

高手，您好！能否问您一个问题，我最近在做一个植物的总蛋白，您说透析要用缓冲盐，用蒸馏水不行吗？我的总蛋白得除盐和小分子化合物，用PBS缓冲液透析除盐，再过道G25分离柱除小分子，我就想过了道G25分离柱后蛋白不是都在水溶液里了，还稳定吗
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8楼2013-11-28 10:29:13
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