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梦想与现实共舞

木虫 (正式写手)

[求助] FITC标记蛋白中的Sephadex G25柱

我想用荧光标记蛋白,现在从网上找到一些实验方法大致相同,其中最后一步都是用Sephadex G25柱除去游离荧光素,有的在这一步前面有加透析,有的没有。我现在的疑问是Sephadex G25柱除了可以除去游离的荧光素,还有什么作用?我知道透析可以将小分子的FITC除去,如果Sephadex G25柱仅是除FITC,那么用透析不就可以了吗?非得要用Sephadex G25柱吗?
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ashui001

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lixiangde(金币+2): 感谢回帖交流 2011-05-19 18:08:21
梦想与现实共舞(金币+10): 请问每次透析所需的溶液要有多少合适?比如5ml的溶液,透析液要多少呢? 2011-05-19 21:56:19
G25柱和透析的目的都是除去没修饰到蛋白上的游离荧光分子,二者用一个就行了
G25柱实验时间比较短,但装柱,和检测都比较麻烦,最好有AKTA仪器做起来比较方便
透析做起来比较简单,根据你的蛋白和荧光素的分子量选择适当分子量的透析袋,透析1-2天也几乎能去除游离的荧光分子,透析溶液要用蛋白的缓冲液,刚开始透析的时候多换几次液
kundaobio.com,昆道生物,量子点合成、修饰及其生物医学应用,量子点荧光抗体定制和服务
2楼2011-05-19 16:19:41
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ashui001

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-05-20 09:20:32
梦想与现实共舞(金币+20): 2011-05-20 17:25:44
引用回帖:
Originally posted by ashui001 at 2011-05-19 16:19:41:
G25柱和透析的目的都是除去没修饰到蛋白上的游离荧光分子,二者用一个就行了
G25柱实验时间比较短,但装柱,和检测都比较麻烦,最好有AKTA仪器做起来比较方便
透析做起来比较简单,根据你的蛋白和荧光素的分子量 ...

5ml的用500ml或者1000ml的烧杯透析就差不多了,要能淹没透析袋,并且最好用磁子搅拌透析液,使透析袋在溶液中旋转比较好
kundaobio.com,昆道生物,量子点合成、修饰及其生物医学应用,量子点荧光抗体定制和服务
3楼2011-05-20 08:31:52
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梦想与现实共舞

木虫 (正式写手)

我在文献中看到的都是有用Sephadex G25柱的,如果不用发文章的时候会不会被质疑?请问你有没有相关文献是没有用Sephadex G25柱,只做到透析这一步的?
4楼2011-05-20 17:28:31
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ashui001

木虫 (著名写手)


dengyfd(金币+1): 谢谢回帖交流 2011-05-21 20:38:56
这个应该不会有质疑的,透析也是很常见的除盐方法,甚至比过柱子还常见的,文献应该很多的,这是实验细节,很多都是一笔带过的
kundaobio.com,昆道生物,量子点合成、修饰及其生物医学应用,量子点荧光抗体定制和服务
5楼2011-05-21 09:23:53
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竹间

新虫 (小有名气)


markar: 金币+1, 感谢回帖交流,欢迎常来生物材料版! 2012-06-11 09:46:12
引用回帖:
1345474楼: Originally posted by 梦想与现实共舞 at 2011-05-20 17:28:31
我在文献中看到的都是有用Sephadex G25柱的,如果不用发文章的时候会不会被质疑?请问你有没有相关文献是没有用Sephadex G25柱,只做到透析这一步的?

如果FITC过量很多的话,透析很难完全除尽,单纯用Sephadex G25效果可能也不算很理想,因此搭配使用效果会更好。另外,你可以在透析后,取透析外液检测一下看有没有FITC。
每天做好一些简单的事,坚持下来就变得不简单了。
6楼2012-06-11 09:30:57
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宁静小合子

新虫 (初入文坛)

请问楼主是否知道如何用FITC去标记一个单链DNA?
7楼2012-06-13 22:43:37
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baicai1487

铁虫 (小有名气)

红舟流星: 欢迎新虫来生物材料板块交流,有问题可以开新帖询问 2013-11-28 12:13:15
引用回帖:
2楼: Originally posted by ashui001 at 2011-05-19 16:19:41
G25柱和透析的目的都是除去没修饰到蛋白上的游离荧光分子,二者用一个就行了
G25柱实验时间比较短,但装柱,和检测都比较麻烦,最好有AKTA仪器做起来比较方便
透析做起来比较简单,根据你的蛋白和荧光素的分子量选 ...

高手,您好!能否问您一个问题,我最近在做一个植物的总蛋白,您说透析要用缓冲盐,用蒸馏水不行吗?我的总蛋白得除盐和小分子化合物,用PBS缓冲液透析除盐,再过道G25分离柱除小分子,我就想过了道G25分离柱后蛋白不是都在水溶液里了,还稳定吗
8楼2013-11-28 10:29:13
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