| 查看: 2968 | 回复: 7 | ||
[求助]
求助质粒大提配方（自己配试剂）或哪家的质粒大提试剂盒更好 已有1人参与
|
| 求助质粒大提配方（自己配试剂）或哪家的质粒大提试剂盒更好 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有235人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 酵母质粒转化及提取验证问题求助
已经有12人回复
- 【求助/交流】表达载体转化后,提取的质粒和原来不一样了啊
已经有5人回复
- 【求助/交流】试剂盒提取重组质粒的A260/A280=2.08,求帮忙分析一下
已经有4人回复
- 【求助/交流】弱弱地问一句，质粒提取试剂盒使用前需要灭菌吗
已经有12人回复
- 【求助/交流】中提质粒的时候需要加RNA酶吗？
已经有6人回复
- 【求助/交流】我用菌液摇菌抽提质粒浓度很低，请大家帮忙解决下，为什么
已经有16人回复
- 【求助/交流】质粒提取的杂质去除问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】质粒提取中的一点问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】质粒提取
已经有10人回复
- 【求助/交流】质粒DNA提取后的PCR
已经有12人回复
brightfuture01
木虫之王 (文坛精英)
我爱打老虎
- MolEPI: 14
- 应助: 24 (小学生)
- 贵宾: 1.2
- 金币: 113338
- 散金: 1526
- 红花: 224
- 沙发: 1
- 帖子: 28965
- 在线: 3720.7小时
- 虫号: 464575
- 注册: 2007-11-21
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
2楼2011-05-16 13:14:09
3楼2011-05-16 13:17:47
4楼2011-05-16 13:19:31
5楼2011-05-16 17:15:38
beautybanana
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 22
- 应助: 23 (小学生)
- 贵宾: 0.02
- 金币: 2973.8
- 散金: 5088
- 红花: 26
- 帖子: 1694
- 在线: 485.8小时
- 虫号: 1142157
- 注册: 2010-11-09
- 性别: GG
- 专业: 纳米生物学
【答案】应助回帖
|
告诉你自己配置大量提取质粒的方法：（推荐以及参考） 首先是溶液的配制： （I）：Solution I : 组分浓度 ：25mM Tris-Hcl (pH8.0），10mM EDTA， 50mM Glucose: 配制量：1 L 1M Tris-Hcl (pH8.0） 25ml 0.5M EDTA(pH8.0） 20ml 20% Glucose（1.11M）45ml dH2O 910ml 高温高压灭菌后4℃保存 ，使用前每50ml的Solution I中加入2ml的RNase A(20mg/ml) （II）Solution II:组分浓度 ：200mM NaOH,1%(W/V)SDS 配置量 500ml 10%SDS 50ml 2M NaOH 50ml 加灭菌水定容至500ml 充分混匀，室温保存（时间最好不要超过1个月） SDS容易产生气泡，不要剧烈搅拌。 （III）Solution III:组分浓度：3M KOAc，5M CH3COOH 配制量：500ml KOAc 147g CH3COOH 57.5ml 加入300ml去离子水搅拌溶解，加去离子水定容至500ml 高温高压灭菌后4℃保存。 根据自己需要的量等比例缩小配置量（Solution I,Solution II and Solution III） 质粒DNA的提取 (1) 用无菌接种环在平板上挑取单菌落，接种到5mlLB液体培养基（含 100ug/ml Amp），37℃ 220rpm振荡培养过夜。 (2) 取1.5mL培养液倒入1.5mLeppendorf管中，12000rpm离心1min。 弃尽上清，使液体流尽。 (3) 加入预冷的溶液Ⅰ100uL，漩涡振荡，悬浮菌体沉淀，冰浴5min。 (4) 加入新配制的溶液Ⅱ200uL，立即将离心管缓缓颠倒数次直到溶液变清亮，冰浴5min。 (5) 加入预冷的溶液Ⅲ150uL，温和混匀，冰浴5min。12000rpm离心10 min。 (6) 将上清移入干净的1.5 mL dorf 管中，加入等体积（约450ul）酚/氯仿（1：1），上下颠倒混匀，12000rpm离心5min。 (7) 将上层水相移入干净的1.5 mL eppendorf 离心管中，加入2.5倍体积（约 1mL）预冷的无水乙醇，上下颠倒混匀后，置－20℃冰箱中20 min。 (8) 室温12000rpm离心10 min。 (9) 彻底去上清，沿管壁加1mL 70%乙醇漂洗沉淀，立即倒去上清，自然干燥。 (10) 将沉淀溶于40uL TE（含10ug/mL的RNase A）中，37℃保温30 min。 (11) 用1.0%琼脂糖凝胶电泳，检测提取情况，余下质粒于-20℃保存备 用。 根据你的需要，按比例提取大体积的菌液质粒，有5ml或是10ml或是50ml的离心管的话先离心均液，然后按体积的比例加试剂即可。应该很方便，离心时间可以减少至5min也可以，第（7）步放入－20℃冰箱中20 min可以减少至10min，总体时间大概在1h以内吧~  |
6楼2011-05-16 18:52:02
beautybanana
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 22
- 应助: 23 (小学生)
- 贵宾: 0.02
- 金币: 2973.8
- 散金: 5088
- 红花: 26
- 帖子: 1694
- 在线: 485.8小时
- 虫号: 1142157
- 注册: 2010-11-09
- 性别: GG
- 专业: 纳米生物学
【答案】应助回帖
|
告诉你自己配置大量提取质粒的方法：（推荐以及参考） 首先是溶液的配制： （I）：Solution I : 组分浓度 ：25mM Tris-Hcl (pH8.0），10mM EDTA， 50mM Glucose: 配制量：1 L 1M Tris-Hcl (pH8.0） 25ml 0.5M EDTA(pH8.0） 20ml 20% Glucose（1.11M）45ml dH2O 910ml 高温高压灭菌后4℃保存 ，使用前每50ml的Solution I中加入2ml的RNase A(20mg/ml) （II）Solution II:组分浓度 ：200mM NaOH,1%(W/V)SDS 配置量 500ml 10%SDS 50ml 2M NaOH 50ml 加灭菌水定容至500ml 充分混匀，室温保存（时间最好不要超过1个月） SDS容易产生气泡，不要剧烈搅拌。 （III）Solution III:组分浓度：3M KOAc，5M CH3COOH 配制量：500ml KOAc 147g CH3COOH 57.5ml 加入300ml去离子水搅拌溶解，加去离子水定容至500ml 高温高压灭菌后4℃保存。 根据自己需要的量等比例缩小配置量（Solution I,Solution II and Solution III） 质粒DNA的提取 (1) 用无菌接种环在平板上挑取单菌落，接种到5mlLB液体培养基（含 100ug/ml Amp），37℃ 220rpm振荡培养过夜。 (2) 取1.5mL培养液倒入1.5mLeppendorf管中，12000rpm离心1min。 弃尽上清，使液体流尽。 (3) 加入预冷的溶液Ⅰ100uL，漩涡振荡，悬浮菌体沉淀，冰浴5min。 (4) 加入新配制的溶液Ⅱ200uL，立即将离心管缓缓颠倒数次直到溶液变清亮，冰浴5min。 (5) 加入预冷的溶液Ⅲ150uL，温和混匀，冰浴5min。12000rpm离心10 min。 (6) 将上清移入干净的1.5 mL dorf 管中，加入等体积（约450ul）酚/氯仿（1：1），上下颠倒混匀，12000rpm离心5min。 (7) 将上层水相移入干净的1.5 mL eppendorf 离心管中，加入2.5倍体积（约 1mL）预冷的无水乙醇，上下颠倒混匀后，置－20℃冰箱中20 min。 (8) 室温12000rpm离心10 min。 (9) 彻底去上清，沿管壁加1mL 70%乙醇漂洗沉淀，立即倒去上清，自然干燥。 (10) 将沉淀溶于40uL TE（含10ug/mL的RNase A）中，37℃保温30 min。 (11) 用1.0%琼脂糖凝胶电泳，检测提取情况，余下质粒于-20℃保存备 用。 根据你的需要，按比例提取大体积的菌液质粒，有5ml或是10ml或是50ml的离心管的话先离心菌液收集菌体，然后按体积的比例加试剂即可。应该很方便，离心时间可以减少至5min也可以，第（7）步放入－20℃冰箱中20 min可以减少至10min，总体时间大概在1h以内吧~ |
7楼2011-05-16 18:54:20
qq263671900
银虫 (初入文坛)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 823.5
- 帖子: 20
- 在线: 5.7小时
- 虫号: 1773230
- 注册: 2012-04-23
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
8楼2015-04-04 13:27:13
