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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR3‘端扩增
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linyanfei

铜虫 (小有名气)

[交流] PCR3‘端扩增 已有4人参与

请各位大侠帮忙啊，我连续做了好几次3’端得扩增，用的试剂盒，都不行，到底怎么回事啊？我感觉提取的RNA质量还行，不知道哪里出了问题。我是新手，拜托老手们指导一下！谢谢啦
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1楼 2011-05-13 22:09:30
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
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Originally posted by linyanfei at 2011-05-15 11:35:30:
没有，昨天重新提取了RNA，我今天再反转录cDNA试试，如果不行的话，可能就是反转录酶有可能有问题，或者像你说的一样，做一下内参，谢谢，呵呵

你说RNA质量不错，是从胶上看的吗？有没有测OD值？
OD260测RNA的量，
260/280和260/230测质量。

如果RNA有提取试剂的污染（Trizol、苯酚等等）会严重影响反转录反应。
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6楼2011-05-15 11:51:37
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
这个要一步一步检查了，既然觉得RNA不好，不如重新做。
话说，无图无真相啊~
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2楼2011-05-14 00:15:41
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linyanfei

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-05-14 00:15:41:
这个要一步一步检查了，既然觉得RNA不好，不如重新做。
话说，无图无真相啊~

呵呵，首先谢谢啦！我是觉得RNA质量还行，有很清晰的28s,18s和5s.然后反转录的时候也是按照说明书上的步骤来的，但是还是不行。下次做的时候我打算先在60度保温十分钟，看一下RNA有没有降解，如果是降解了做后面的似乎都是白做！
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3楼2011-05-14 20:00:15
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by linyanfei at 2011-05-14 20:00:15:
呵呵，首先谢谢啦！我是觉得RNA质量还行，有很清晰的28s,18s和5s.然后反转录的时候也是按照说明书上的步骤来的，但是还是不行。下次做的时候我打算先在60度保温十分钟，看一下RNA有没有降解，如果是降解了做后 ...

有没有试过拿cDNA去扩内参基因？这个是检验cDNA质量常用的方法。
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4楼2011-05-15 01:09:07
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