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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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shenhaiwang

金虫 (小有名气)

[求助] 求助!PCR扩增不出全长DNA序列怎么办?

我在做PCR时,所用引物是根据整个阅读框设计的,扩增出来的DNA理论上应该是1000bp左右,但是扩增出来的只有171bp的DNA片段,从电泳图上看,扩增条带很亮,特异性也很好;测序后发现此扩增片段跟我所要全长序列的3'端能够完全比对,并且包含下游引物序列。貌似上游引物没有扩增出任何条带,只是下游引物的单引物扩增,多次改变退火温度,结果依然如此,我下一步该怎么办呢?急切希望各位虫友出手相助,指点迷津,吾感激不尽!
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475502411

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-05-09 07:59:24
shenhaiwang(金币+2): 嗯,可能是。谢谢!我在合成之前对引物进行了评价,都不是很理想,最后选了一个相对比较好的,拿去合成了。 2011-05-09 09:31:57
感觉是你引物特异性的问题,还是重新设计引物吧,先把引物放在oligo6和引物BLAST上评价一下在合成
可以朝九晚五,也能浪迹天涯
4楼2011-05-08 22:40:12
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倔强的投手

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 同感 2011-05-08 19:47:22
shenhaiwang(金币+2): 谢谢! 2011-05-08 20:19:31
估计是引物的问题吧
重新设计引物
3楼2011-05-08 19:15:03
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小小_木虫

木虫 (小有名气)

引物方向是不是都是朝一个方向走的?
5楼2011-05-09 08:51:23
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shenhaiwang

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 小小_木虫 at 2011-05-09 08:51:23:
引物方向是不是都是朝一个方向走的?

谢谢你,不过引物的方向我确定没有问题的。
6楼2011-05-09 12:53:25
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