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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助！PCR扩增不出全长DNA序列怎么办？
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shenhaiwang

金虫 (小有名气)

[求助] 求助！PCR扩增不出全长DNA序列怎么办？

我在做PCR时，所用引物是根据整个阅读框设计的，扩增出来的DNA理论上应该是1000bp左右，但是扩增出来的只有171bp的DNA片段，从电泳图上看，扩增条带很亮，特异性也很好；测序后发现此扩增片段跟我所要全长序列的3'端能够完全比对，并且包含下游引物序列。貌似上游引物没有扩增出任何条带，只是下游引物的单引物扩增，多次改变退火温度，结果依然如此，我下一步该怎么办呢？急切希望各位虫友出手相助，指点迷津，吾感激不尽！
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1楼 2011-05-08 17:03:37
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sfb1020

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 好主意 2011-05-11 13:49:55
可能是引物设计的不好，出现了非特异条带。全基因不好设计引物，可以分段设疑引物，分段P。
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19楼2011-05-11 11:03:16
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