| 查看: 3294 | 回复: 11 | ||
| 本帖产生 1 个 MicEPI ，点击这里进行查看 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
syn1985木虫 (正式写手)
|
[求助]
我的放线菌细胞壁很难破，求助各位大虾
|
|
我想构建基因组文库，可是前面DNA提取就很头疼，按照操作手册上写的加入2mg/ml的溶菌酶破壁，但是水浴2h都不行，后来我把溶菌酶的浓度提高到10mg/ml还是不行，有没有谁有好的破壁方法啊。 |
回复此楼» 猜你喜欢
北京211副教授，35岁，想重新出发，去国外做博后，怎么样？
已经有8人回复
-
Cas 72-43-5需要30g，定制合成，能接单的留言
已经有7人回复
-
磺酰氟产物，毕不了业了！
已经有5人回复
-
论文终于录用啦！满足毕业条件了
已经有25人回复
-
2026年机械制造与材料应用国际会议 （ICMMMA 2026）
已经有3人回复
-
自荐读博
已经有3人回复
-
求助:我三月中下旬出站，青基依托单位怎么办？
已经有5人回复
-
不自信的我
已经有5人回复
-
投稿Elsevier的杂志（返修），总是在选择OA和subscription界面被踢皮球
已经有8人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求各位大虾帮忙
已经有4人回复
- 细菌超声破碎，上清为酶液还是沉淀…………
已经有3人回复
- 求板块内大虾帮助鉴别一下物种
已经有23人回复
- 生物材料方面有哪位大虾中了国自然吗？
已经有4人回复
- 求助：等体积与等表面积
已经有9人回复
- 求助：粪便中微生物细胞的提取方法？
已经有4人回复
- 各位大虾：外审难还是盲审难啊？小弟不懂，请教各位大虾了！
已经有7人回复
- 求助各位大虾！！！
已经有5人回复
- 放线菌DNA的提取
已经有4人回复
- 细胞裂解缓冲液的配制？求助各位大虾
已经有3人回复
- 各位大虾，求助水中有微量的油份，如何检测，快一点的方法？
已经有3人回复
- 破细菌细胞壁时冻融时间以及温度的选择
已经有6人回复
- 求蓝藻（蓝细菌）的细胞壁破碎方法
已经有13人回复
- 请问大虾些这是什么菌？
已经有6人回复
- 求大虾指教微生物考研方向
已经有17人回复
- 求助啊！！各位大虾，在线等啊！！
已经有4人回复
- 微生物破壁问题
已经有5人回复
- 放线菌基因组DNA提取后，用TE不溶！！？
已经有20人回复
- 【求助/交流】提取基因前破碎细胞的更便宜和更佳的改进方法？
已经有3人回复
- 【求助/交流】有关氯仿-异戊醇
已经有33人回复
- 【求助】请教各位大虾，做反应时四口烧瓶的瓶口如何保温？
已经有38人回复
- 【求助】求助各位大虾，学习FPGA问题！
已经有9人回复
- 【求助/交流】细胞破壁问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】培养细胞的大虾来帮帮忙！尼日利亚菌素的使用
已经有5人回复
- 【求助】请问一下各位朋友，怎么样计算我过电力的排放比较合适呢？
已经有5人回复
【答案】应助回帖
★ ★
syn1985(金币+2): 谢谢 这个方法我试过 提取的DNA长度不够 2011-05-04 15:35:11
rainwander(金币+2): 鼓励交流 2011-05-05 17:28:54
rainwander(EPI+1): 2011-05-05 17:29:50
syn1985(金币+2): 谢谢 这个方法我试过 提取的DNA长度不够 2011-05-04 15:35:11
rainwander(金币+2): 鼓励交流 2011-05-05 17:28:54
rainwander(EPI+1): 2011-05-05 17:29:50
|
建议用以下方法试一下： 取0.15g新鲜菌体于研钵(-20℃预冷)中,反复液氮研磨至细粉状,迅速平均分装至2个1.5mL离心管中;加TE Buffer 550μL,加65℃预热的20% SDS溶液30μL,漩涡振荡5s,加20mg/mL蛋白酶K 20μL,轻轻混匀,37℃保温1h;加等体积Tris饱和酚/氯仿/异戊醇(25∶24∶1)抽提,轻微颠倒混匀,10000r/min离心10min;小心吸取上清至新离心管中,加等体积氯仿/异戊醇(24∶1)抽提,10000r/min离心5min,吸取上清液与等体积异丙醇(4℃预冷)混匀,然后10000r/min离心3min,弃上清。沉淀用1mL 70%乙醇(4℃预冷)洗涤1min,自然风干,加入40μL TE溶解,-20℃保存备用。 本人做过，效果还可以 |
7楼2011-05-04 14:24:37