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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 我的放线菌细胞壁很难破，求助各位大虾
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syn1985

木虫 (正式写手)

[求助] 我的放线菌细胞壁很难破，求助各位大虾

我想构建基因组文库，可是前面DNA提取就很头疼，按照操作手册上写的加入2mg/ml的溶菌酶破壁，但是水浴2h都不行，后来我把溶菌酶的浓度提高到10mg/ml还是不行，有没有谁有好的破壁方法啊。
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1楼 2011-05-03 17:25:07
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

syn1985(金币+5): 谢谢 不过不知道这样会不会对提取出来的DNA长度有影响呢 2011-05-04 15:34:20
rainwander: 一接种环的量是多少？ 2011-05-05 17:28:40
本人的经验，加粉末溶菌酶一接种环的量，然后过夜
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帮助虫友，提升自己
4楼2011-05-04 09:10:12
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
syn1985(金币+3): 太谢谢了 我试试 2011-05-05 09:26:01
rainwander(金币+2): 鼓励交流 2011-05-05 17:29:20
不会的，放线菌属于阳性菌，很难破壁，我以前是做红球菌的属于放线菌科，加大溶菌酶的用量，就直接加买回来的溶菌酶粉末的，破壁效果很好，DNA的长度与你提取操作轻柔有关，至于研磨的方法我也用过，提出的总DNA，效率很高，但容易成粉末絮状，做DNA杂交没有问题，建库不行
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9楼2011-05-04 16:29:31
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-05-05 17:29:32
还有一点，溶菌酶加多了，细胞壁多糖比较多的话，采用上面仁兄说的CTAB法，改进一下提取方式，祝你实验成功
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10楼2011-05-04 16:31:26
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