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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物化学 » 液相测定样品 保留时间不稳定？怎么办？？
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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)

[求助] 液相测定样品 保留时间不稳定？怎么办？？

EDTA铁的液相检测问题
采用液相检测EDTA铁，保留时间不稳定，第一天6.6分，第二天10分，第三天3分，第四天10分

保留时间跟我玩起来捉迷藏有戏，请大家多多指教。以下是详细内容。

柱子 Agilent XDB C8

流动相：40%四丁基氢氧化铵溶液3.25ml加水130ml，再用8.8%甲酸溶液调PH至3.30，加甲醇125ml，再用水稀释至1000ml
，此时PH约为3.50

液相条件 波长254nm ，流速1.0ml/min进样量20  EDTA铁浓度0.1mg/ML


第一天：保留时间6.6 分，没在意

第二天：使用前一天流动相、柱子，保留时间跑到10分，以为是EDTA铁在新使用的柱子上有一定饱和时限，所以勉强解释了一下，希望以后会稳定。继续试验

第三天：新换流动相，柱子未换，保留时间跑到3分，以为甲醇加多了或者试剂的问题，狂配流动相，连续更换3次流动相，样品保留时间均在3分。
放弃，无语了。

第四天：死马当活马医，继续用前一天的柱子，流动相，前一天的样品，保留时间重新回到了10分。

以上样品在四天检测当中，峰形和峰面积没有明显变化。

分析以上：排除了流动相、样品、柱子、仪器的因素，实在找不出原因了。还怀疑是流动相的PH导致样品不稳定，后来查询了EDTA铁的PKA在pKPK1=0.0 (CO2H)
pK2=1.5 (CO2H)
pK3=2.00 (CO2H)
pK4=2.69 (CO2H)
pK5=6.13 (NH+)
pK6=10.37 (NH+)  来自维基百科

EDTA铁为二元酸  PKA为2.00 依据此 在PH3.5 是稳定的  

为什么呢？ 不过从目前来看，好像是流动相PH的原因啊
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1楼 2011-04-29 10:45:19
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weirb

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
karl2100(金币+1): 3Q 2011-04-30 00:35:24
反相柱流动相中使用离子对试剂（四丁基氢氧化铵）要充分平衡，使其在固定相上充分饱和才可以，40%的四丁基氢氧化铵溶液至少要80ml以上，可以用0.1ml/min的流动相过夜，再测。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-04-29 11:59:30
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
karl2100(金币+1): 谢谢回复！ 2011-04-30 00:35:52
pH在样品的pKa±1内，保留时间变化最大。
调pH时注意温度对pH计及pH的影响，校准及测量温度控制在25±1内。
另外，注意柱温箱控温。
赞一下(1人) 回复此楼
守候在风中的宁静。
3楼2011-04-29 12:40:39
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liulangtj

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
karl2100(金币+1): 多谢提供！ 2011-04-30 00:36:05
第一天：甲醇按照比例配制，合适。时间6min
第二天：原流动相中的甲醇过夜挥发，时间10min
第三天：重配流动相，配错了。
第四天：甲醇又挥发了，刚好10min。
换个人试试或者双人复核吧，看你就知道刚入行，道行太浅。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-04-29 13:14:54
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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by liulangtj at 2011-04-29 13:14:54:
第一天：甲醇按照比例配制，合适。时间6min
第二天：原流动相中的甲醇过夜挥发，时间10min
第三天：重配流动相，配错了。
第四天：甲醇又挥发了，刚好10min。
换个人试试或者双人复核吧，看你就知道刚入行，道 ...

您好  那请问 我第三天 在同一天之内配三次流动相 都是在3分钟 怎么解释

难道三次都配错了

敢问  您老入行多久了

不过有没有能力 好像跟入行时间不成正比吧
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5楼2011-05-03 14:52:09
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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by weirb at 2011-04-29 11:59:30:
反相柱流动相中使用离子对试剂（四丁基氢氧化铵）要充分平衡，使其在固定相上充分饱和才可以，40%的四丁基氢氧化铵溶液至少要80ml以上，可以用0.1ml/min的流动相过夜，再测。

谢谢大家的热心帮助
1 柱温一直是室温  这几天的温度变化也不大

2 溶解样品的试剂 是水 ，样品处理是一致的。难道跟这个有关系？

谢谢不吝赐教
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6楼2011-05-03 14:52:19
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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 痴夷子皮 at 2011-04-29 12:40:39:
pH在样品的pKa±1内，保留时间变化最大。
调pH时注意温度对pH计及pH的影响，校准及测量温度控制在25±1内。
另外，注意柱温箱控温。

谢谢大家的热心帮助
1 柱温一直是室温  这几天的温度变化也不大

2 溶解样品的试剂 是水 ，样品处理是一致的。难道跟这个有关系？

谢谢不吝赐教
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7楼2011-05-03 14:52:30
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宁静de夏

金虫 (正式写手)
引用回帖:
462359楼: Originally posted by laoyisng1122 at 2011-05-03 14:52:30
谢谢大家的热心帮助
1 柱温一直是室温  这几天的温度变化也不大

2 溶解样品的试剂 是水 ，样品处理是一致的。难道跟这个有关系？

谢谢不吝赐教...

请问你的问题解决了吗
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8楼2012-10-25 19:15:27
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瑞玲

木虫 (正式写手)
想问下您的问题解决了吗 目前我也遇到了这个问题 别人说 柱子不让冲出来 下次接着用 这样好吗
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9楼2013-04-08 16:19:58
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