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wkl1984

金虫 (小有名气)

[求助] RNA提取问题

从细胞中提取RNA,在加入Trizol后,混匀,室温放置10分钟,目的是RNA和蛋白分离,然后加入氯仿,促使RNA进入水相中,12000转,离心10分钟,取上清转移至新管,加入等体积的异丙醇,目的为了使RNA沉淀,可是离心后没有沉淀,我不知道还用不用继续往下做?出现这种情况的原因在哪儿?请各位指教
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xuguanghai

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

wkl1984(金币+1): 2011-04-29 13:52:34
有可能是氯仿残留,多加点异丙醇试一试
3楼2011-04-29 08:31:33
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jiangzhiang

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

wkl1984(金币+1): 2011-04-29 13:52:29
可能是肉眼看不见吧,不能完全确定没有,最好还是往下做做看
2楼2011-04-29 08:23:02
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gagalady

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

wkl1984(金币+2): 2011-04-29 13:52:41
加完TRIzol后,要立即把细胞裂解,这一步要求快,放十分钟没必要,5分钟就ok;
加氯仿之后,要用力震荡,(用最大的力气),这步是也要放置一会的吧
此步之后高速4度离心15分钟吧
之后就是把上清洗出来(1ml TRIzol 的话 没必要吸出很多 300微升 就很多了,吸多了 不保险呀)
异丙醇我都加 500微升  加进去要枪头混匀,之后静置10min,低温不利于沉淀哦,室温,之后4度离心,沉淀很少的,不过对着光 用肉眼看 还是很能看清楚的。
多提取几次 就利索了
4楼2011-04-29 08:53:18
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nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)

具体点
1. 初始细胞量多少?
2. 氯仿量?
3. 取上清的量?
4. 异丙醇的量?

如果上述都正常,可在异丙醇沉淀的时候加点glycogen,提完之后测下RNA的量
生活是美好的
5楼2011-04-29 08:54:53
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