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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4, EPI+1): 鼓励~ 2011-04-28 16:49:59
首先楼主你是想干什么?以后求助的时候一定得说清楚你想干什么?反正从你的帖子我没有很明确看出来你想干什么?
我猜:你是想验证你的基因是不是已经连接上了,然后就用菌液来进行PCR?如果正如我所说,我的建议如下:
1:泳道2有可能是对的,但是为神马这么模糊,你的对照都这么亮?
2:其它泳道不排除连上的概率,可以再进行一次PCR验证,体系得改改啊。。。
3:可以将有可能对的菌液提取质粒进行PCR(质粒当模板);或者酶切验证。

PS:说说对于一般连接验证的步骤:
1:可以用菌液,也可以将菌划到板子上,我们常用后者;然后用菌液当模板进行PCR,结果会显示哪一个菌能够P出目的条带;
2:将疑似正确的菌提取质粒,跑电泳,点上空质粒作为对照,如果连上的话一般重组质粒会稍微大一些;
3:酶切质粒,电泳验证,记得点上酶切的基因和酶切的质粒进行对照。。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-04-28 16:32:09
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智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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西瓜(金币+5, EPI+1): Good!快检的方法很好,我们实验室也常用。 2011-04-28 16:54:30
我觉得验证这种重组质粒最好先快检一下然后再提质粒酶切,没必要直接PCR。
快检就是直接用摇起的菌液取100uL,加50uL的苯酚和50uL的氯仿涡旋离心,取上清跑胶,对照上个空载体,就是没有连片段前的质粒(环合的哈),或者和你载体差不多大小的质粒也可,一般连进去的重组质粒会跑得慢点,凭这个就能鉴定哪些连进去了,然后再提质粒酶切就好了
在等待中涅槃重生
9楼2011-04-28 16:52:45
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