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wzc4884

金虫 (正式写手)

[求助] 求PCR解!谢谢!

大家好,求解PCR,希望大家指点一下。附件是我今天做的PCR结果。泳道14是阴性PCR对照即模板是2微升二次水,泳道11、12是阳性PCR结果,泳道2至10是待检验的菌液,(其中菌液是从构建的重组质粒中转化BL21DE3后,挑取单克隆摇起的菌液,直接加2微升菌液进行的PCR)。请大家帮助分析下,是否是阳性结果呢?还是根本就是假阳性的单克隆呢?谢谢了!
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good!快检的方法很好,我们实验室也常用。 2011-04-28 16:54:30
我觉得验证这种重组质粒最好先快检一下然后再提质粒酶切,没必要直接PCR。
快检就是直接用摇起的菌液取100uL,加50uL的苯酚和50uL的氯仿涡旋离心,取上清跑胶,对照上个空载体,就是没有连片段前的质粒(环合的哈),或者和你载体差不多大小的质粒也可,一般连进去的重组质粒会跑得慢点,凭这个就能鉴定哪些连进去了,然后再提质粒酶切就好了
在等待中涅槃重生
9楼2011-04-28 16:52:45
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


1949stone(金币+1): 鼓励 2011-04-28 19:03:10
1有可能是对的,其他的大小和你阳性有差别,建议1提质粒酶切验证
在等待中涅槃重生
2楼2011-04-28 16:16:01
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

wzc4884(金币+1): 谢谢! 2011-04-28 16:35:36
说错了,是第二道可能是对的
在等待中涅槃重生
3楼2011-04-28 16:16:38
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by wzc4884 at 2011-04-28 15:50:14:
大家好,求解PCR,希望大家指点一下。附件是我今天做的PCR结果。泳道14是阴性PCR对照即模板是2微升二次水,泳道11、12是阳性PCR结果,泳道2至10是待检验的菌液,(其中菌液是从构建的重组质粒中转化BL21DE3后,挑 ...

我也举得泳道2(maker右边第一个)是对的。可以提质粒,跟载体一起跑胶,跑久点,如果是重组质粒,会比载体跑得慢,从胶上可以看出来。之后再酶切最后验证。
4楼2011-04-28 16:19:13
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