| 查看: 5470 | 回复: 11 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
y_ylili铁虫 (初入文坛)
|
[求助]
提取大肠杆菌质粒失败的原因
|
||
用碱裂解法发提取大肠杆菌质粒DNA~加入异丙醇之后有大量的絮状物，离心后沉淀很少，乙醇洗涤，干燥，跑胶的居然没有亮带？！已经做了3次~十几管了~呜~纠结....求助.... |
回复此楼» 猜你喜欢
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有216人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 有木有大肠杆菌单拷贝的表达质粒？
已经有3人回复
- 质粒导入大肠杆菌
已经有9人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌转化质粒，出来的不是我要的了，怎么回事？
已经有13人回复
- 【求助/交流】提取大肠杆菌质粒时，所用的大肠杆菌菌液在4°C可以保存多长时间?
已经有9人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌，农杆菌质粒
已经有11人回复
- 【求助/交流】质粒转入大肠杆菌怎么都不长啊
已经有11人回复
- 【求助/交流】菌落PCR问题
已经有23人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母质粒转化大肠杆菌
已经有11人回复
空谷幽风
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 32
- 应助: 13 (小学生)
- 贵宾: 0.05
- 金币: 1106.1
- 散金: 500
- 红花: 13
- 帖子: 615
- 在线: 116.5小时
- 虫号: 714271
- 注册: 2009-03-04
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
y_ylili(金币+1): 莪是加了3液以后再加的氯仿 异戊醇的(～ o ～)~zZ 2011-04-26 18:02:15
|
你的试剂配制有问题：你用的是碱裂解法提取质粒，溶液一和溶液二没有问题，但溶液三你叫它中和液，但成分竟然是酚氯仿异戊醇，没有酸怎么能叫中和液呢，正常的成分是冰醋酸和3mol/L的醋酸钾，溶液三中的钾离子置换了SDS中的钠离子生成了不溶性的PDS，大家都知道SDS专门喜欢结合蛋白质，平均两个氨基酸上结合一个SDS分子，所以由于置换产生的大量沉淀顺便连蛋白质也沉淀下来了，又因为基因组DNA实在太长了，在这个过程中很自然的被PDS给共沉淀了。你所谓的酚氯仿异戊醇是纯化DNA或RNA时用到的，先弄清楚每种试剂的作用做起来就不会这么盲目了，祝你好运！ |
10楼2011-04-25 15:43:17
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
2楼2011-04-24 17:17:57
lixg
铁杆木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 61 (初中生)
- 金币: 7627.1
- 散金: 1
- 红花: 7
- 帖子: 591
- 在线: 106.4小时
- 虫号: 859417
- 注册: 2009-09-29
- 专业: 发育生物学
3楼2011-04-24 17:34:02
yuxia82012
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 4980
- 散金: 2225
- 红花: 2
- 帖子: 1340
- 在线: 426.5小时
- 虫号: 781881
- 注册: 2009-05-29
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
4楼2011-04-24 18:14:31
200