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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 这样做胶回收可以吗
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wangchunling

金虫 (小有名气)

[交流] 这样做胶回收可以吗 已有7人参与

pcr之后的琼脂糖胶，直接把目的条带切下来放在90多度热水中过5分钟左右，然后吸取上层溶液做纯化连接可以吗？
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1楼 2011-04-21 11:16:44
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yuxia82012

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-21 15:45:44
不可以，你本身配琼脂糖的缓冲液里是含盐的，还有琼脂糖，这些都会影响连接酶的效率，最好还是用胶回收试剂盒回收吧
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在等待中涅槃重生
2楼2011-04-21 11:40:48
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★
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1949stone(金币+4): 给不给你epi呢 2011-04-21 15:46:07
楼主这方法哪来的？我是没听说过呢。
我只听说过用试剂盒胶回收的，孤陋寡闻了……
个人认为“90多度热水中过5分钟”并不能使琼脂糖胶融化，估计DNA出不来的。
楼主的方法如果有人用过也做得出来，不如分享下详细步骤哈，至少偶很感兴趣，嘿嘿
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3楼2011-04-21 11:48:21
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wangchunling

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-21 11:48:21:
楼主这方法哪来的？我是没听说过呢。
我只听说过用试剂盒胶回收的，孤陋寡闻了……
个人认为“90多度热水中过5分钟”并不能使琼脂糖胶融化，估计DNA出不来的。
楼主的方法如果有人用过也做得出来，不如分享下详 ...

呃这是我的老师告诉我的方法，他说，在90多度的时候dna变性，单链dna就会跑到溶液里了……但我还没做成功……
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4楼2011-04-21 14:34:05
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wangchunling

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yuxia82012 at 2011-04-21 11:40:48:
不可以，你本身配琼脂糖的缓冲液里是含盐的，还有琼脂糖，这些都会影响连接酶的效率，最好还是用胶回收试剂盒回收吧

要是老板也像你这么想就好了……
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5楼2011-04-21 14:34:35
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★
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1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-21 15:46:20
一般情况下，PCR产物如果条带比较杂的话，才会做切胶纯化，当然可以继续进行下游工作的。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-04-21 15:43:11
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-21 11:48:21:
楼主这方法哪来的？我是没听说过呢。
我只听说过用试剂盒胶回收的，孤陋寡闻了……
个人认为“90多度热水中过5分钟”并不能使琼脂糖胶融化，估计DNA出不来的。
楼主的方法如果有人用过也做得出来，不如分享下详 ...

我这够不着EPI啦……
都是一些不可靠的话：“个人认为”，“估计”
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7楼2011-04-21 17:19:52
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roomofxw

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+4): good 2011-04-21 23:25:10
也不是不可以，可以切好，捣碎了放在冰箱里面冷冻一下，取出后离心取上清。
可以用的，当然效果一定没有试剂盒好
不过若是好做的基因，问题不大。
若是好不容易P出来一点，那还是老老实实的保险
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8楼2011-04-21 20:15:58
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
还是试剂盒吧
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9楼2011-04-21 21:03:11
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
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这方法吓得我一身冷汗啊，真是强悍！
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
10楼2011-04-21 22:22:43
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