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wangchunling

金虫 (小有名气)

[交流] 这样做胶回收可以吗 已有7人参与

pcr之后的琼脂糖胶,直接把目的条带切下来放在90多度热水中过5分钟左右,然后吸取上层溶液做纯化连接可以吗?
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-21 15:45:44
不可以,你本身配琼脂糖的缓冲液里是含盐的,还有琼脂糖,这些都会影响连接酶的效率,最好还是用胶回收试剂盒回收吧
在等待中涅槃重生
2楼2011-04-21 11:40:48
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
1949stone(金币+4): 给不给你epi呢 2011-04-21 15:46:07
楼主这方法哪来的?我是没听说过呢。
我只听说过用试剂盒胶回收的,孤陋寡闻了……
个人认为“90多度热水中过5分钟”并不能使琼脂糖胶融化,估计DNA出不来的。
楼主的方法如果有人用过也做得出来,不如分享下详细步骤哈,至少偶很感兴趣,嘿嘿
3楼2011-04-21 11:48:21
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wangchunling

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-21 11:48:21:
楼主这方法哪来的?我是没听说过呢。
我只听说过用试剂盒胶回收的,孤陋寡闻了……
个人认为“90多度热水中过5分钟”并不能使琼脂糖胶融化,估计DNA出不来的。
楼主的方法如果有人用过也做得出来,不如分享下详 ...

这是我的老师告诉我的方法,他说,在90多度的时候dna变性,单链dna就会跑到溶液里了……但我还没做成功……
4楼2011-04-21 14:34:05
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wangchunling

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yuxia82012 at 2011-04-21 11:40:48:
不可以,你本身配琼脂糖的缓冲液里是含盐的,还有琼脂糖,这些都会影响连接酶的效率,最好还是用胶回收试剂盒回收吧

要是老板也像你这么想就好了……
5楼2011-04-21 14:34:35
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★ ★
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1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-21 15:46:20
一般情况下,PCR产物如果条带比较杂的话,才会做切胶纯化,当然可以继续进行下游工作的。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-04-21 15:43:11
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-21 11:48:21:
楼主这方法哪来的?我是没听说过呢。
我只听说过用试剂盒胶回收的,孤陋寡闻了……
个人认为“90多度热水中过5分钟”并不能使琼脂糖胶融化,估计DNA出不来的。
楼主的方法如果有人用过也做得出来,不如分享下详 ...

我这够不着EPI啦……
都是一些不可靠的话:“个人认为”,“估计”
7楼2011-04-21 17:19:52
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roomofxw

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+4): good 2011-04-21 23:25:10
也不是不可以,可以切好,捣碎了放在冰箱里面冷冻一下,取出后离心取上清。
可以用的,当然效果一定没有试剂盒好
不过若是好做的基因,问题不大。
若是好不容易P出来一点,那还是老老实实的保险
8楼2011-04-21 20:15:58
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

还是试剂盒吧
9楼2011-04-21 21:03:11
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
这方法吓得我一身冷汗啊,真是强悍!
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
10楼2011-04-21 22:22:43
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