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定量pcr的污染问题
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大家好！最近在做定量，但是不知道什么原因空白对照也出现扩增。情况是这样的：我用CDNA模板做了5个梯度稀释，准备先做标准曲线。出来的结果浓度大的3个模板扩增曲线的ct值都相隔一定值，比较正常；浓度小的那2个曲线较接近了；而且那个空白对照也有扩增。 我分析应该不会是二聚体，因为溶解曲线只有一个峰，而且扩增曲线随着模板浓度的减小而后移。大觉觉得是这样吗？ 我先以为是气溶胶污染，然后换了个地方做，还是有阴性扩增 后来我去别人的实验室做，用的人家的枪和实验室，就没有扩增了 所以我觉得可能是我的枪污染了，我同学的实验室不方便去了，我换了个从没做过分子实验的地方做，又换了我实验室的别的枪做，还是有阴性扩增 最后我买了那种带滤膜的枪头，不知道大家用过吗？就是枪头上有那种滤膜，说是可以防污染的，用了之后还是有阴性扩增。 请问谁知道怎么办啊？或者帮我出出主意啊，我实在是没办法了，每次都有扩增。谢谢大家帮忙！ |
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