| 查看: 2442 | 回复: 11 | |||
| 本帖产生 3 个 MicEPI ，点击这里进行查看 | |||
[交流]
【求助/交流】大家来看下我的RNA电泳图
|
|||
我想做反转录，然后扩增目的条带，不知道RNA提得可以吗？第一个泳道不知道为什么跟其他的不一样？ |
回复此楼» 猜你喜欢
急需调剂
已经有9人回复
-
申博/考博
已经有4人回复
-
化工学硕294分，求导师收留
已经有37人回复
-
求调剂
已经有11人回复
-
260求调剂
已经有4人回复
-
一志愿华中农业071010，320求调剂
已经有19人回复
-
304求调剂
已经有7人回复
-
求博导｜生物质基多孔碳/超级电容方向，已有相关成果，寻能源材料/碳材料方向老师
已经有3人回复
-
二苯甲酮酸类衍生物
已经有6人回复
-
接受任何调剂
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 新手提RNA，电泳图看不懂
已经有18人回复
- 昆虫RNA 提取！电泳图，看不懂！请高手指点！
已经有9人回复
- 请大家帮忙分析下RNA电泳图
已经有3人回复
- 求高手指点RNA电泳图~~~~
已经有25人回复
- 请请各位帮忙分析一下我的RNA电泳图
已经有6人回复
- 请帮忙分析一下RNA电泳图
已经有8人回复
- 【求助/交流】RNA电泳图
已经有4人回复
- 【求助/交流】RNA电泳
已经有15人回复
- 【求助/交流】帮我看看假丝酵母总RNA提取电泳图
已经有7人回复
- 重新传照片,帮忙分析RNA电泳图有赏
已经有8人回复
- 【求助/交流】帮我分析一下RNA电泳图
已经有20人回复
- 【求助/交流】想问问大家都是怎么进行RNA电泳
已经有10人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
散金祈福
+1/486
-
青岛大学/康复大学导师课题组2026年博士研究生
+3/353
-
不寻找搭子，寻一位，深圳合伙人
+1/269
-
欧洲“CO2捕集与加氢催化转化”博士招聘（捷克-德国-斯洛文尼亚三国项目）
+1/90
-
凝胶成像，WB化学发光成像系统专业制造商-上海新叶分析仪器
+1/88
-
湖南大学材料学院电镜中心招收2026年博士生
+1/87
-
森林工程课题组招调剂学术型硕士研究生，机不可失，期待您的加入。
+1/37
-
江西科技师范大学086生物与医药
+1/37
-
上海交通大学-电气工程学院-高温超导磁体-2026年入学全日制博士生招聘
+1/34
-
西工大国家级青年人才招聘微尺度传热方向博士后/研究助理
+1/33
-
爱情短剧
+1/28
-
东北林业大学刘松教授、香港城大刘彬教授联合招收二氧化碳催化方向博士
+1/15
-
香港城市大学机械系张冏博士课题组招聘博士后
+1/13
-
上海交通大学材料成形（塑性加工）常年招聘硕士研究生、博士研究生和博士后
+1/10
-
中国科学技术大学苏州高等研究院凤建岗课题组诚招博士后
+1/8
-
中科院物理所李泓/吉林大学毛慧灿团队联合诚聘博士后
+1/8
-
大连大学—六盘水师范学院联培硕士调剂
+1/8
-
基金祈福
+1/4
-
2026年华南师范大学光电科学与工程学院魏嵬课题组招收硕士调剂生
+1/4
-
香港城市大学机械系张冏博士课题组招聘先进制造方向博士后
+1/4
11楼2011-04-23 22:07:33
2楼2011-04-18 06:48:11
3楼2011-04-18 09:30:10
4楼2011-04-18 13:17:02
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wolfebst(EPI+1): 回答不错 2011-04-18 14:36:44
tutufei(金币+5): 谢谢你的建议！ 2011-04-23 00:04:47
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wolfebst(EPI+1): 回答不错 2011-04-18 14:36:44
tutufei(金币+5): 谢谢你的建议！ 2011-04-23 00:04:47
|
其实提取RNA的条件没那么苛刻，在普通的通风橱里就可以操作，外源RNase的污染比较好消除，关键是破壁时的内源降解。如果用trizol法就必须考虑trizol的量。 另外，相同的方法提取不同细菌的RNA效果也不一样。比如霍乱用trizol法提取效果极差，而沙门菌提取效果就较好；所以霍乱菌最好是用试剂盒过柱子提取，然后浓缩。我提取的是大肠杆菌，摸索了好几种方法，最后确定也是qiagen 的kit提取，然后浓缩。 另外，有一种可以喷的液体，叫做RNase抑制剂，用于消除表面RNase的污染，在客观条件不是很好的时候很有效。 最后祝lz实验顺利，好运啊！ |
5楼2011-04-18 14:25:16
6楼2011-04-18 17:57:03
7楼2011-04-23 00:06:38
8楼2011-04-23 15:38:37
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
scelab(金币+9, EPI+1): 很好很强大 2011-04-23 18:09:57
tutufei(金币+5): 谢谢，不好意思我的电泳最上面的条带才是最小的，不是DNA，可是就算少量DNA污染，还是会扩增出目的条带啊，那不就影响结果了吗？ 2011-04-23 21:55:56
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
scelab(金币+9, EPI+1): 很好很强大 2011-04-23 18:09:57
tutufei(金币+5): 谢谢，不好意思我的电泳最上面的条带才是最小的，不是DNA，可是就算少量DNA污染，还是会扩增出目的条带啊，那不就影响结果了吗？ 2011-04-23 21:55:56
|
关于你提的RNA的质量： 1.顶上的亮带是基因组DNA。如果是Trizol法提的，那就可能是抽提之后取上清时取得太多，吸到了中间相。以后这一步不用贪多的。 如果是检测表达量差异，那么基因组DNA混在cDNA里面，会干扰结果。如此多的基因组DNA污染，不能拿来定量。 所幸，你的目的只是拿来扩增目的条带，那这个没关系，你的RNA可以用  2.RNA量质量可以从中间两条rRNA的带看出来，你这两条带都有点拖尾，RNA有部分降解，第一个泳道最严重。 3.第一个泳道出现弥散状，中间两条rRNA的亮带都看不到，是很典型的RNA降解。 4.关于两条rRNA带亮度的差异，两倍是理论值，实际上往往不是这样，不用强求啦。 关于反转录引物的选择： 反转录可分为两种，一种是反转录出总的cDNA,另一种是只反转录你所需的目的基因的cDNA。 1.反转录出总的cDNA：有两种通用引物，一种是随机寡肽，它可以结合到随机位点，并且它的5‘端和3’端都有羟基，都可以介导反转录；另一种是Oligo dT，可以和mRNA的Poly A尾巴结合，但不能介导其他RNA的反转录。Takara的试剂盒同时提供两种引物，并建议两种引物一起用。我觉得如果都有的话，最好一起用。 2.反转录出目的基因的cDNA：这个只能设计特异的引物了。跟PCR引物设计类似。 |
9楼2011-04-23 18:04:13
囧10楼2011-04-23 22:05:03
12楼2011-04-23 22:13:39
