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tutufei

铜虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】大家来看下我的RNA电泳图

我想做反转录，然后扩增目的条带，不知道RNA提得可以吗？第一个泳道不知道为什么跟其他的不一样？

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1楼 2011-04-17 22:32:22

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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wolfebst(EPI+1): 回答不错 2011-04-18 14:36:44
tutufei(金币+5): 谢谢你的建议！ 2011-04-23 00:04:47

引用回帖:

Originally posted by tutufei at 2011-04-18 13:17:02:
提的就是细菌的total RNA，没办法，实验室没做过RNA，所以条件不好，这个电泳没加变性剂

其实提取RNA的条件没那么苛刻，在普通的通风橱里就可以操作，外源RNase的污染比较好消除，关键是破壁时的内源降解。如果用trizol法就必须考虑trizol的量。

另外，相同的方法提取不同细菌的RNA效果也不一样。比如霍乱用trizol法提取效果极差，而沙门菌提取效果就较好；所以霍乱菌最好是用试剂盒过柱子提取，然后浓缩。我提取的是大肠杆菌，摸索了好几种方法，最后确定也是qiagen 的kit提取，然后浓缩。

另外，有一种可以喷的液体，叫做RNase抑制剂，用于消除表面RNase的污染，在客观条件不是很好的时候很有效。

最后祝lz实验顺利，好运啊！