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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 【求助/交流】大家来看下我的RNA电泳图
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tutufei

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】大家来看下我的RNA电泳图

我想做反转录，然后扩增目的条带，不知道RNA提得可以吗？第一个泳道不知道为什么跟其他的不一样？
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1楼 2011-04-17 22:32:22
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
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rainwander(金币+1, EPI+1): 相应管理员号召，开始加大EPI给予力度~ 2011-04-18 13:22:07


提取的大肠杆菌total RNA，可以用来做转录组分析的。大条带应该是小条带亮度的两倍最好，最差也得亮度差不多，对应的数量差不多。

祝lz实验顺利！

[ Last edited by zhaohq1209 on 2011-4-18 at 09:31 ]
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3楼2011-04-18 09:30:10
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
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wolfebst(金币+1): 鼓励多多交流 2011-04-18 08:11:57
引用回帖:
Originally posted by tutufei at 2011-04-17 22:32:22:
我想做反转录，然后扩增目的条带，不知道RNA提得可以吗？第一个泳道不知道为什么跟其他的不一样？

不知lz提取的是什么东东的RNA？

我提过细菌的total RNA。从lz的电泳图来看，质量不好。RIN值太低，表明降解严重。
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2楼2011-04-18 06:48:11
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tutufei

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2011-04-18 06:48:11:
不知lz提取的是什么东东的RNA？

我提过细菌的total RNA。从lz的电泳图来看，质量不好。RIN值太低，表明降解严重。

提的就是细菌的total RNA，没办法，实验室没做过RNA，所以条件不好，这个电泳没加变性剂
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4楼2011-04-18 13:17:02
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
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wolfebst(EPI+1): 回答不错 2011-04-18 14:36:44
tutufei(金币+5): 谢谢你的建议！ 2011-04-23 00:04:47
引用回帖:
Originally posted by tutufei at 2011-04-18 13:17:02:
提的就是细菌的total RNA，没办法，实验室没做过RNA，所以条件不好，这个电泳没加变性剂

其实提取RNA的条件没那么苛刻，在普通的通风橱里就可以操作，外源RNase的污染比较好消除，关键是破壁时的内源降解。如果用trizol法就必须考虑trizol的量。

另外，相同的方法提取不同细菌的RNA效果也不一样。比如霍乱用trizol法提取效果极差，而沙门菌提取效果就较好；所以霍乱菌最好是用试剂盒过柱子提取，然后浓缩。我提取的是大肠杆菌，摸索了好几种方法，最后确定也是qiagen 的kit提取，然后浓缩。

另外，有一种可以喷的液体，叫做RNase抑制剂，用于消除表面RNase的污染，在客观条件不是很好的时候很有效。

最后祝lz实验顺利，好运啊！
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5楼2011-04-18 14:25:16
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