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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】分子克隆
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fhh819

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】分子克隆已有8人参与

请教高手：1、为什么我在蓝白斑筛选的时候，板子上全是白斑，没有篮班，但是菌液pcr检测的时候，跳了120多个菌，才有2个p出目的条带！
                  2、为什么我的板子上白斑少，并且都在靠近培养皿的边上，连成一片，没有分开！
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俱怀逸兴壮思飞，欲上青天揽明月！
1楼2011-04-16 21:27:45
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新人小玥

木虫 (正式写手)
污染了吧~
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2楼2011-04-16 22:30:04
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+3): good 2011-04-17 14:26:50
1：首先楼主蓝白斑筛选的原理清楚吗？你是想要蓝斑，但是没有，说明什么？说明你没有连接上，你应该找你连接的问题而不是一直纠结为什么那么多白斑而无蓝斑。

2：你说白斑少，全在培养皿边上，你的涂布问题吧？
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-04-17 09:24:29
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fhh819

银虫 (小有名气)
不对吧，没有连上应该有蓝斑才对呀。
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俱怀逸兴壮思飞，欲上青天揽明月！
4楼2011-04-17 20:29:03
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-17 09:24:29:
1：首先楼主蓝白斑筛选的原理清楚吗？你是想要蓝斑，但是没有，说明什么？说明你没有连接上，你应该找你连接的问题而不是一直纠结为什么那么多白斑而无蓝斑。

2：你说白斑少，全在培养皿边上，你的涂布问题吧？

哥们，蓝白斑筛选是要白斑才对！
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5楼2011-04-18 17:11:33
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-04-18 17:11:33:
哥们，蓝白斑筛选是要白斑才对！

介个我当然知道，只不过楼主说的太不清楚了。。。我是再一一回答他。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-04-18 17:17:32
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+3): good 2011-04-18 18:52:36
引用回帖:
Originally posted by fhh819 at 2011-04-16 21:27:45:
请教高手：1、为什么我在蓝白斑筛选的时候，板子上全是白斑，没有篮班，但是菌液pcr检测的时候，跳了120多个菌，才有2个p出目的条带！
                  2、为什么我的板子上白斑少，并且都在靠近培养皿的边上， ...

1.关于只长白斑不长蓝斑问题：最可能的原因是你的显色剂失效了（除非你找了个没有蓝白斑筛选功能的质粒当载体，我想这种低级错误您不会犯的）
2.关于第二个问题：应该是你涂板的问题，没涂均匀
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7楼2011-04-18 17:21:55
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-18 17:17:32:
介个我当然知道，只不过楼主说的太不清楚了。。。我是再一一回答他。

呵呵
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
8楼2011-04-18 17:22:41
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郝钊

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+3): 欢迎交流 2011-04-18 18:52:51
第一个问题确实应该考虑一下X-gal的问题，再一个你提质粒看一看，因为很多因素影响PCR的结果。第二个问题，你可能没有涂开，也可能是平板上的水滴下来，长成了菌膜。
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9楼2011-04-18 17:49:55
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djrhewc

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): 欢迎交流 2011-04-20 08:31:25
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-04-18 17:21:55:
1.关于只长白斑不长蓝斑问题：最可能的原因是你的显色剂失效了（除非你找了个没有蓝白斑筛选功能的质粒当载体，我想这种低级错误您不会犯的）
2.关于第二个问题：应该是你涂板的问题，没涂均匀

你好，我也遇到这个问题，做蓝白斑筛选时，板上白斑很多，蓝斑极少，但挑取白斑做菌落PCR，基本上只有几个有目的片段，其余全是空载。然后我做了一个对照，直接将空载体转入感受态细胞涂板，结果，板上还是还是有很多白斑（已经置于冰箱过夜了），这个可否说明X-gal和IPTG可能失效了？
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10楼2011-04-20 08:29:39
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