24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知(长期有效)
查看: 1666  |  回复: 15
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

fhh819

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】分子克隆已有8人参与

请教高手:1、为什么我在蓝白斑筛选的时候,板子上全是白斑,没有篮班,但是菌液pcr检测的时候,跳了120多个菌,才有2个p出目的条带!
                  2、为什么我的板子上白斑少,并且都在靠近培养皿的边上,连成一片,没有分开!
回复此楼
俱怀逸兴壮思飞,欲上青天揽明月!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

djrhewc

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
dhd997(金币+2): 欢迎交流 2011-04-20 08:31:25
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-04-18 17:21:55:
1.关于只长白斑不长蓝斑问题:最可能的原因是你的显色剂失效了(除非你找了个没有蓝白斑筛选功能的质粒当载体,我想这种低级错误您不会犯的)
2.关于第二个问题:应该是你涂板的问题,没涂均匀

你好,我也遇到这个问题,做蓝白斑筛选时,板上白斑很多,蓝斑极少,但挑取白斑做菌落PCR,基本上只有几个有目的片段,其余全是空载。然后我做了一个对照,直接将空载体转入感受态细胞涂板,结果,板上还是还是有很多白斑(已经置于冰箱过夜了),这个可否说明X-gal和IPTG可能失效了?
10楼2011-04-20 08:29:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

djrhewc

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by fhh819 at 2011-04-16 21:27:45:
请教高手:1、为什么我在蓝白斑筛选的时候,板子上全是白斑,没有篮班,但是菌液pcr检测的时候,跳了120多个菌,才有2个p出目的条带!
                  2、为什么我的板子上白斑少,并且都在靠近培养皿的边上, ...

另外,请问楼主,我挑了100个白斑,菌落pcr之后大约只有3,4个有目的条带,质粒,感受态细胞,切胶试剂盒全都换过,还是不能解决这个很简单的实验,快被老师逼疯了...刚做了一个对照,空载体转入感受态细胞,长的斑也大部分为阳性,可能X-gal失效?准备不用蓝白斑直接来挑菌尝试下.
11楼2011-04-20 08:58:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

djrhewc

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by beibei9535 at 2011-04-20 13:09:21:
首先解决你问题。
其次,想给点建议,希望能明白蓝白斑筛选的原理和注意事项。

1、为什么我在蓝白斑筛选的时候,板子上全是白斑,没有篮班,但是菌液pcr检测的时候,跳了120多个菌,才有2个p出目的条带!
额 ...

分析的不错,考虑下
15楼2011-04-20 14:28:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fhh819 的主题更新
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见