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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教下蛋白酶水解以及lowry方法测定蛋白质
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jsjjqc

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教下蛋白酶水解以及lowry方法测定蛋白质 已有1人参与

实验中需要引入商用蛋白酶将几种常见的标准蛋白质(以BSA为例)进行水解，测定蛋白酶对该蛋白的水解效率。我的疑惑是，如果测定酶解反应前后蛋白质的含量(Lowry方法，加入相应试剂后750nm测定吸光度)，通过比较反应前后测定蛋白质含量是不是不可行？即使大分子蛋白质肽键被水解了生成一段段的氨基酸，也会被算作蛋白质含量是吗？如果不可行有什么测定方法能反映出究竟有多少蛋白质被水解掉？我生物背景很弱，请教学长的意见和建议，谢谢你们！
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1楼 2011-04-13 10:19:46
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+5): good 2011-04-13 13:23:22
大分子蛋白质肽键被水解了生成一段段的下肽，只要不是游离氨基酸，也是会被Lowry法算作蛋白质含量的。所以Lowry法在这里不可行，其他几个测定蛋白含量的方法比如考马斯亮蓝法也不大合适，建议SDS-PAGE测定，然后分析。
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2楼2011-04-13 10:55:18
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