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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物电泳条带弥散？？？
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xwsooo

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR产物电泳条带弥散？？？

我用的模板用其他PCR方法成功P出清晰的条带，但是现在做普通的PCR,不知道为什么条带是弥散的？

目的条带在300多bp,引物合成单上两条引物tm值一样，都为56度。
引物序列在NCBI上搜索过，没有与基因组上非目的序列非特异性结合的

反应体系是按照taq酶上的说明书设定的
94度3min,
94度30sec,56度30sec,72度1min,共30循环
72度7min

引物（10mM）2微升，dNTP(2.5mM)4微升，酶0.5微升，模板1微升


2%胶，110V，45min


marker跑的很清楚，没有弥散，应该不是电泳的问题，那么反应体系出了什么问题么？



[ Last edited by xwsooo on 2011-4-11 at 20:27 ]
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1楼 2011-04-11 19:47:37
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忆-雪

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也出现楼主一样的电泳情况
我的PCR条件是：94度5min,
94度30sec,50度30sec,72度45S,共25循环
72度7min
引物1ul，PCR Mix 1ul，模板0.5ul
1%胶，100-90V，45min
marker电泳条带，样品出现跟楼主一样的情况
赞一下 回复此楼
16楼2012-03-26 13:11:39
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
无图无真相

延伸30s足够了
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2楼2011-04-11 20:17:10
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xwsooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by rainwander at 2011-04-11 20:17:10:
无图无真相

延伸30s足够了

这样呀？延伸长了容易弥散？
赞一下 回复此楼
3楼2011-04-11 20:18:41
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
★ ★ ★
xwsooo(金币+1): 2011-04-11 20:39:56
西瓜(金币+3): 鼓励。版主抽空来不容易。 2011-04-11 22:53:38
引用回帖:
Originally posted by xwsooo at 2011-04-11 20:18:41:
这样呀？延伸长了容易弥散？

弥散

好多可能的因素呢

模板量、DNTPs、酶........
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-04-11 20:26:15
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