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xwsooo

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】PCR产物电泳条带弥散???

我用的模板用其他PCR方法成功P出清晰的条带,但是现在做普通的PCR,不知道为什么条带是弥散的?

目的条带在300多bp,引物合成单上两条引物tm值一样,都为56度。
引物序列在NCBI上搜索过,没有与基因组上非目的序列非特异性结合的

反应体系是按照taq酶上的说明书设定的
94度3min,
94度30sec,56度30sec,72度1min,共30循环
72度7min

引物(10mM)2微升,dNTP(2.5mM)4微升,酶0.5微升,模板1微升


2%胶,110V,45min


marker跑的很清楚,没有弥散,应该不是电泳的问题,那么反应体系出了什么问题么?



[ Last edited by xwsooo on 2011-4-11 at 20:27 ]
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)


★ ★ ★
xwsooo(金币+1): 2011-04-11 20:39:56
西瓜(金币+3): 鼓励。版主抽空来不容易。 2011-04-11 22:53:38
引用回帖:
Originally posted by xwsooo at 2011-04-11 20:18:41:
这样呀?延伸长了容易弥散?

弥散

好多可能的因素呢

模板量、DNTPs、酶........
4楼2011-04-11 20:26:15
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)


无图无真相

延伸30s足够了
2楼2011-04-11 20:17:10
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xwsooo

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by rainwander at 2011-04-11 20:17:10:
无图无真相

延伸30s足够了

这样呀?延伸长了容易弥散?
3楼2011-04-11 20:18:41
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xwsooo

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by rainwander at 2011-04-11 20:26:15:
弥散

好多可能的因素呢

模板量、DNTPs、酶........

我上了电泳图了
5楼2011-04-11 20:37:12
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