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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】WB过程中跑电泳时，蛋白质外漏
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qiang7

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】WB过程中跑电泳时，蛋白质外漏

加完蛋白样品，在跑SDS聚丙烯酰胺电泳时，5min-10min的时候蛋白样品还没有有到达分离胶，甚至加样孔里的蛋白样品还没有全部进入浓缩胶的时候，一些孔的蛋白样品就从孔中沿着浓缩胶就漏了下来，流出来的样品沿着分离胶与浓缩胶的界限位置流到两侧，最近小弟经常遇到此类情况，特向各位高手求助，请各位高手多多指教！当然浓缩胶肯定凝固了，因为考虑到此情况，配完浓缩胶放了很久
谢谢
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1楼 2011-04-11 08:57:38
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落明逐暗

金虫 (正式写手)
会不会是玻璃板变形造成？
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5楼2011-04-13 16:34:40
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晴天1882

木虫 (正式写手)
qiang7(金币+1): 2011-04-13 09:13:24
qiang7(金币+1): 2011-04-25 14:55:05
会不会是分离胶中的聚丙酰胺没有聚合，蛋白没有孔径进入分离胶，一般30分钟左右分离胶都能聚合，TEMED的量不能太多，只是起加速聚合作用，多的话会使胶变硬，变脆，胶容易裂开，蛋白肯定就跑不进孔径里了。觉得可能还是胶哪里出了问题。
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2楼2011-04-12 18:31:53
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qiang7

金虫 (小有名气)
可是配完胶 我都等了很久了一个小时应该可以完全聚合了吧？还有我的TEMED加的量不多啊浓缩胶 2ml加2ulTEMED,每次跑电泳10个孔跑5min左右总有2个孔左右漏样品
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3楼2011-04-13 09:17:32
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ujsyangyong

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-04-13 13:21:47
qiang7(金币+1): 2011-04-14 19:20:35
从来没遇到过这种情况，猜想可能是浓缩胶配制有问题或者就是浓缩胶与分离胶分界面有问题，提出以下几点点建议供参考：
1. 配胶前将玻璃板彻底清洁，对光检查玻璃板表面是否光洁，最好是每次用完立即清洗，无尘晾干，下次用就比较方便了。
2.在配胶时，在加入TEMED之前充分混匀
3.在分离胶凝固之后尽量去掉上层压胶的液体，在倾倒去除后可以以滤纸吸掉残余液体，注意不要碰到分离胶
4.还有一般边上两个孔容易受到浓缩胶凝固收缩的影响使得两侧边缘的孔不是很完整，最好不要用，以空白loading buffer上样可以保证各泳道蛋白条带宽度一致

[ Last edited by ujsyangyong on 2011-4-13 at 12:48 ]
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4楼2011-04-13 12:43:56
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