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yananjizhu

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】westernblot已有5人参与

各位虫友:
      大家好,想问下做westernblot时上样量一样,为什么最后显色时条带的宽窄和明暗不一样呢,是抗体假的不均匀,还是转膜时转到膜上的量就不一样,或者还有其他的原因,谢谢指教
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)

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Originally posted by linyingjia at 2011-04-10 18:24:36:
我们也是   一抗重复用

我想问下一抗重复利用多少次  谢谢指教
5楼2011-04-11 17:45:21
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 75372017 at 2011-04-10 17:34:49:
孵育抗体的时候最好是将膜完整的泡在抗体稀释液中(比较烧钱,国内一般都不会这么做),

我就是这么做的,一般取10ml抗体稀释液浸泡膜,然后再水平摇床上摇。。。

我想问下一抗可以重复利用多少次  谢谢指教
6楼2011-04-11 17:46:18
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by ujsyangyong at 2011-04-10 11:33:10:
这要看你每个泳道所上蛋白样品中目的蛋白的表达量是否存在差异,如果确实存在差异,那么出现这种结果就是完全正常的。不过需要排除由于上样、转膜、孵育抗体以及显色不均匀带来的影响。我Wersternblot做过很多,总 ...

谢谢 我的分子量是180  你有没遇到过这么大分子量的 我的转膜时间是3.5h,会不会有点过长  条带跑出来也不很均匀 改怎么修正 请指教 谢谢您
7楼2011-04-11 17:49:15
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