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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】是否需要去磷酸化
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】是否需要去磷酸化

pET29a质粒用kpnI和EcoRI酶切，酶切是分两步单酶切进行的，酶切后需要进行去磷酸化再和目的片段链接吗？
谢谢！
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1楼 2011-04-07 21:09:37
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zmw_520

禁虫 (小有名气)
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-04-08 08:36:02
本帖内容被屏蔽
2楼2011-04-07 23:17:16
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-04-08 08:36:05
dhd997(金币+2): 很活跃，鼓励之 2011-04-08 08:50:53
引用回帖:
Originally posted by xiaoyu1014126 at 2011-04-07 21:09:37:
pET29a质粒用kpnI和EcoRI酶切，酶切是分两步单酶切进行的，酶切后需要进行去磷酸化再和目的片段链接吗？
谢谢！

没必要呢，实验步骤能省就省。
以前我会做去磷，后面发现不去磷也差不多，之后就省这一步了。
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3楼2011-04-07 23:46:54
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p120933799

金虫 (小有名气)
★
dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-04-08 13:25:09
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-04-09 09:40:50
不用，除非有特别说明
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-04-08 11:56:31
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sfb1020

金虫 (小有名气)
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-04-09 09:40:47
两次单酶切有没有完全切开的可能，为了尽量少出现假阳性要进行去磷酸化。如果你确保两次单酶切完全切开了，就不用去磷酸化。
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5楼2011-04-08 16:12:43
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