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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】是否需要去磷酸化

pET29a质粒用kpnI和EcoRI酶切,酶切是分两步单酶切进行的,酶切后需要进行去磷酸化再和目的片段链接吗?
谢谢!
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zmw_520

禁虫 (小有名气)

xiaoyu1014126(金币+1): 2011-04-08 08:36:02
本帖内容被屏蔽

2楼2011-04-07 23:17:16
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★ ★
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-04-08 08:36:05
dhd997(金币+2): 很活跃,鼓励之 2011-04-08 08:50:53
引用回帖:
Originally posted by xiaoyu1014126 at 2011-04-07 21:09:37:
pET29a质粒用kpnI和EcoRI酶切,酶切是分两步单酶切进行的,酶切后需要进行去磷酸化再和目的片段链接吗?
谢谢!

没必要呢,实验步骤能省就省。
以前我会做去磷,后面发现不去磷也差不多,之后就省这一步了。
3楼2011-04-07 23:46:54
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p120933799

金虫 (小有名气)



dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-04-08 13:25:09
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-04-09 09:40:50
不用,除非有特别说明
4楼2011-04-08 11:56:31
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sfb1020

金虫 (小有名气)


xiaoyu1014126(金币+1): 2011-04-09 09:40:47
两次单酶切有没有完全切开的可能,为了尽量少出现假阳性要进行去磷酸化。如果你确保两次单酶切完全切开了,就不用去磷酸化。
5楼2011-04-08 16:12:43
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