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nininini

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助】关于引物非特异性的问题

我的引物25bp左右,目的产物100左右,以基因组为模板时扩增特异性很好,没发现非特异性,但后来以cDNA为模板却出现了50多的位置有一个明显的条带,目的条带也是有的,我的对照组没有加模板,只有引物,条带却是在100bp左右,那我的50bp左右的条带会是什么呢,请高手帮忙解释一下
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nininini(金币+1):谢谢参与
看看融解曲线的情况吧。最好把图放上来哦。
2楼2011-04-06 19:13:01
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nininini

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-06 19:13:01:
看看融解曲线的情况吧。最好把图放上来哦。

是先用普通PCR 验证引物 P的,还没做real-time呢
3楼2011-04-06 19:17:00
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)



nininini(金币+1):谢谢参与
你是要做什么啊,如果是普通的P就不用基因组为模板啊,说的很模糊啊~~
4楼2011-04-06 20:01:03
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★ ★ ★
nininini(金币+1):谢谢参与
看天(金币+2): 鼓励交流 2011-04-06 22:36:45
楼主看是不是有这种可能:楼主设计的引物时跨了内含子,以基因组DNA为模版扩增时扩出来的100bp包含了内含子,而提取的RNA含有未除干净的DNA,反转录成cDNA时,扩增的条带中包含了两种条带,即以DNA为模版的扩增和以cDNA为模板的扩增。
5楼2011-04-06 21:59:23
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65900931

银虫 (小有名气)



nininini(金币+1):谢谢参与
最好看看电泳图。
6楼2011-04-06 22:50:50
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nininini

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by blackrose8089 at 2011-04-06 21:59:23:
楼主看是不是有这种可能:楼主设计的引物时跨了内含子,以基因组DNA为模版扩增时扩出来的100bp包含了内含子,而提取的RNA含有未除干净的DNA,反转录成cDNA时,扩增的条带中包含了两种条带,即以DNA为模版的扩增和以 ...

我的是细菌的RNA,不存在内含子的问题~~还有什么解释方法吗~~谢谢啦~
7楼2011-04-07 10:39:35
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